Informe Microbiolog A 2









Informe Microbiología
“Tinciones”

















Integrantes: Daniela Pérez O.
Cristian Rojas
Brenda Ovalle
Docente: Ruth Ortega

Introducción
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea, y elmedio más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de células o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como esporas, cápsulas, etc.
Las células generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teñirlas, proceso llamado fijación. Para bacterias, la fijación por elcalor es lo más corriente, aunque también puede fijarse con sustancias químicas como formaldehido, ácidos y alcoholes. Después de la fijación, si se añade el colorante, no se producen ulteriores cambios estructurales en el protoplasma. La fijación se realiza habitualmente en células que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando después éste con el agente fijador, y siguiendoinmediatamente el proceso de tinción. La fijación produce habitualmente el encogimiento de las células; la tinción, por el contrario, hace que las células aparezcan mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las células que han sido fijadas o teñidas no pueden realizarse con mucha precisión. La tinción es una de las técnicas más utilizadas en los laboratorios de microbiología paraclasificar microorganismos.
• El tinte es un compuesto orgánico que le da contraste a la célula.
• Cromógeno (solvente orgánico que le provee las propiedades de color)
• Auxócromo (grupo químico que se ioniza con el cromógeno y forma sales que se pegan a las fibras y tejidos).
• La adhesión del tinte va a depender de la carga que posea

Tipos de Tinciones
Simple: Tamaño, arreglo y forma., solo untinte. (Ej.: azul de metileno), directa (tiñe bacteria.) y negativa (tiñe el fondo pero no a la bacteria).

Diferencial: Separar y clasificar los microorganismos observados de acuerdo a sus características, más de un tinte (Ej.: tinción gram y ácido resistente).

Específica: Para identificar estructuras (Ej.: tinción de cápsulas, esporas, flagelos).

Membrana externa de las Gram –
Es soluble ensolventes orgánicos como el alcohol
La capa de peptidoglicano es demasiado delgada como para retener el complejo cristal violeta/yodo que se formó
Por lo que va perdiéndose el color azul-violeta.
Las Gram +
No tienen su capa susceptible a la acción de solventes orgánicos
Se deshidratan los poros y se cierran, reteniéndose el complejo cristal violeta/yodo.
Objetivos

Aplicar mecanismo de la coloraciónde Gram con microorganismos conocidos y desconocidos.
Identificar características de las bacterias, dependiendo de sus estructuras.
Conocer conceptos relacionados con: tinción gran, tinción de esporas, tinción de cápsula.


































Métodos y materiales

-Microscopio
-6 cubreobjetos
-6 portaobjetos
-Guantes
-Asa Loop
-Pinzas de madera-Mechero
-Cultivos bacterianos
-Papel filtro
-Tinta China
-Alcohol
-Aceite de inmersión
-Safranina
-Verde de Malaquita
-Agua destilada
-Lugol
-Cristal violeta

Procedimiento

Tinción Gram

Preparar un frotis de los cultivos bacterianos.
Realizar una fijación a la muestras.
Teñir con cristal violeta y dejar secar al menos 2 minutos.
Teñir con Lugol y dejar secar por 1 minuto.
Lavar conagua destilada.
Teñir con alcohol cetona y seca por algunos segundos.
Lavar con agua destilada.
Secar por contacto.
Teñir con safranina y dejar secar al menos un minuto
Lavar con agua destilada y secar por contacto.
Agregar aceite de inmersión.
Llevar al microscopio y observar 100X.




Tinción de Esporas

Preparar frotis de la muestra.
Cubrir con papel filtro.
Teñir con verde...