Informe Sobre La Extracción Del Adn
OBJETIVO
Examinar un extracto crudo de ADN de células animales y comprobar su estructura fibrilar.
MATERIALES
Materialbiologico: hígado de pollo, timo o gonadas de choro (el tejido debe ser fresco y conservado en frío).
Materiales de laboratorio y reactivos:
* 2 tubos de ensayo grandes
* 1 vaso de precipitado 250ml
* Embudo
* Gasa
* 1 agitar de vidrio.
* Gradilla
* Mortero
* Pipetas
* Termómetros
* Probetas
* Solución salina de NaCl al 0.15M/EDTA 0.1M pH: 8.
*Dodecil-hidrogenio-sulfato-sodico (SDS) 10%
* NaCl 5M
* Solución Cloroformo Alcohol isoamilico (24:1)
* Alcohol etílico 96% helado
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
* Homogenizar 2g de lamuestra biológica en una licuadora o mortero en 10 ml de Solución salina de NaCl al 0.15M/EDTA 0.1M pH: 8.
* Transferir el homogenizado anterior filtrado a una probeta de 100ml y añadir 2ml deldetergente anonico Dodecil-hidrogenio-sulfato-sodico (SDS) 10%. Mezclar.
* Colocar en baño Maria a 60 C por 5 min.
* Añadir 6 ml de NaCl 5M. Mezclar.
* Añadir la solución Cloroformo Alcoholisoamilico (24:1) en un volumen igual al obtenido en la etapa anterior. Agitar vigorosamente
* Centrifugar a 2500rpm por 10 min.
* Separar el sobrenadante con todo cuidado y colocarlo en unaprobeta de 10 ml y agregar dos volúmenes de alcohol 96% helado. El alcohol debe añadirse lentamente y observar las hebras del ADN.
CUESTIONARIO
1.-¿Con que objetivo se utiliza la solución NaCl/EDTA?2.-¿Qué finalidad tiene el uso de SDS y la solución concentrada de NaCl?
3.-¿Qué efecto causa la solución de cloroformo/alcohol isoamilico y el uso de etanol frío en la extracción del ADN?
4.-¿Cómo...
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