Ingeniería Genética

Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Genética microbiana

Práctica: Caracterización fenotípica y física de DNA recombinante.

Equipo: 9

Alumnas:

Navarro Hernández Itze Cecilia

Porras Martiñón Emma Nohemí

Ortega Lozano Tania Janet

Sección: 2 Grupo: 5QM1

Introducción:

La ingeniería genética es el conjunto detécnicas empleadas para introducir DNA foráneo a una célula y lograr que replique y exprese [Luque, J. y A. Herráez. 2001]

* Introducir genes (normalmente de otro ser vivo) en un genoma.
* Eliminar genes.
* Modificar su secuencia de bases
* Secuenciar genes
* Clonar genes

Si aplicamos estos métodos y técnicas a los seres vivos para obtener un producto o servicio, hablamos deBIOTECNOLOGÍA, que ha experimentado una auténtica revolución gracias a ellos. Por ejemplo, la insulina o la hormona del crecimiento que se inyectan los diabéticos hoy día es la humana, pero la fabrican bacterias (E. coli), también se puede citar muchas vacunas. Por tanto la Ingeniería Genética se sitúa entre la Genética Molecular y la Biotecnología. Es decir, para poder fabricar insulina conbacterias antes hay que manipular el gen humano (localizarlo, cortarlo, clonarlo e insertarlo en la bacteria, es decir, hacer ingeniería genética) [Murrell. 1993].
Algunas técnicas son:
1. Tomar o aislar fragmentos específicos de ADN de un organismo, para ello se cortan en puntos concretos. Es decir, fragmentar o cortar el ADN.
2. Unión de fragmentos de ADN.
3. Clonación del ADN, paratener suficientes copias y estudiarlo mejor, o para que se exprese su proteína en grandes cantidades. Se utilizan VECTORES DE CLONACIÓN. También se puede hacer con la técnica llamada PCR (Reaction Chain Polymerase = Reacción en cadena de la Polimerasa.)
4. Insertar un gen en el ADN de otro ser vivo para que se exprese en él, o incluso en sus células germinales para que se transmita a ladescendencia. Es la transformación, y el ADN es recombinante. Así se obtienen ORGANISMOS MODIFICADOS GENÉTICAMENTE ( = O.M.G.) o TRANSGÉNICOS. Para insertarlo en la célula huésped primero se inserta en unos VECTORES DE TRANSMISIÓN = DE EXPRESIÓN.
5. Identificación y secuenciación, y modificación para mejorar el producto, si su producto tiene interés industrial, farmaceútico, agrícola, etc.
Paramanipular el ADN se utilizan herramientas fundamentales: las enzimas de restricción o restrictasas (cortan), las ligasas (unen) y los vectores de transmisión (transportan genes y los insertan en ADN distintos, es decir, de otras especies)
1.- OBTENCIÓN DE FRAGMENTOS DE ADN. CORTE DEL ADN
Se puede hacer utilizando dos tipos de enzimas: las enzimas de restricción y las retrotranscriptasa.
Se denominanenzimas de restricción, restrictasas o endonucleasas de restricción. Reconocen puntos concretos del ADN (secuencias palindrómicas o capicúas) y lo cortan ahí. Actúan como tijeras moleculares. Se conocen más de 100 distintas y cada una corta en una secuencia específica a cada hebra de ADN.

El corte puede ser de dos tipos y así se originan:
* Extremos romos o lisos,
* Extremoscohesivos o pegajosos o escalonado, así puede unirse a otros trozos que sean complementarios.

Enzima Bacteria Tipo de extremo

* Eco RI Escherichia coli cohesivos
* Bam HI Bacillus amyloquefaciens cohesivos
* Hind III Haemophilus influenzae Rd cohesivos

Al cortar una molécula de ADN con distintas enzimasde restricción se obtienen una mezcla de fragmentos de distinto tamaño. Los fragmentos obtenidos se pueden separar por un método llamado electroforesis, basándose en la capacidad de desplazamiento en un campo eléctrico según su tamaño y de carga eléctrica. Las pequeñas recorren una distancia mayor y las largas menor. Los fragmentos se mueven sobre una lámina de gel de agarosa. Después se tiñen...