Inmunnofluorescencia

Inmunofluorescencia - IFA (Immunofluorescense Assay)

En 1941  Coons intentó conjugar  los anticuerpos con colorantes fluorescentes y en 1942 publicó la primera aplicación de esta técnicainmunológica.
Procedimiento especializado que consiste en una reacción de antígeno- anticuerpo, hecha visible por la incorporación de un fluorocromo o molécula fluorescente al anticuerpo, una vez hecha lareacción, se expone a luz UV emitida por el microscopio para ser evidenciado por el fenómeno de fluorescencia.
Dado que los colorantes fluorescentes, como la fluoresceína (Fig. A) y la rodamina, puedenacoplarse a los grupos amino y carboxilo de las proteínas en los anticuerpos sin destruir su especificidad, el conjugado puede combinarse con el antígeno presente. Esta técnica se divide en:*DIRECTA : Consiste en demostrar la presencia de un antígeno mediante reacción directa con un anticuerpo específico marcado con colorante fluorescente. El anticuerpo es obtenido a través de la inoculacióndel microorganismo productor del antígeno en un modelo animal.

*INDIRECTA. Técnica de doble capa en donde se aplica el anticuerpo sin marcar directamente sobre el sustrato de tejido y se visualizapor tratamiento con un suero anti-inmunoglobulina conjugado con fluorocromo.
El proceso consta de dos etapas:
1.- Se fijan sobre un portaobjetos los antígenos que constituyen el substrato conocidoespecífico, sobre él se coloca el suero de quien se sospecha la presencia de anticuerpos específicos, si la reacción es positiva se dará formación de complejo antígeno-anticuerpo no visible ya que elanticuerpo no estaba marcado
2.- Se debe obtener una anti-inmunoglobulina humana marcada, que reaccionará con el anticuerpo del complejo producido en la primera etapa.

VENTAJAS
- Se puedenobtener resultados rápidos.
-No es necesario realizar cultivos.
-Se puede identificar microorganismos específicos en un grupo mixto.
DESVENTAJAS
-Costos en reactivo y equipo
-Debe ser...