Inmunodifusión radial simple

Curso de Inmunología General Laboratorio
Semestre 2014-I
EJERCICIO EXPERIMENTAL 6
Determinar la cantidad de C4 en el plasma humano.
Inmunodifusión Radial (RID). Técnica de Mancini.
OBJETIVOCuantificar la proteína C4 del complemento en una muestra de suero problema.

¿CÓMO?
Mediante el método de inmunodifusión radial simple (RID) descrito por Manzini, Carbonara y
Hermans, que consisteen un gel de agar que contiene el antisuero específico y el antígeno difunde
radialmente a partir de un orificio en la capa de agar de grueso uniforme con formación de
precipitados de forma circular,cuya superficie es proporcional a la concentración de antígeno.
MATERIAL
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I caja petrí de 60X100mm.
1 Micropipeta de 20 y 50 μL.
1 nivelador.
1 mechero
1 tripie y telade asbesto para mechero
1 baño de agua a 45º C (por grupo).
5 mL. de solución de agar noble al 1.5 % en PBS.
1 mL. de solución de agar noble al 0.3 % en PBS.

INTRODUCCIÓN
La Inmunodifusiónradial o Mancini es un tipo de prueba que utiliza un soporte sólido, compuesto
por diferentes sustancias siendo la más común el agar o la agarosa; en este gel existen una serie
de poros a través de loscuales la sustancia que se coloca en ellos puede difundir libremente. Esta
técnica se hace generalmente en una placa, caja petri o porta objeto; consiste en agregar una
determinada cantidad de agaral cual se le ha incorporado, generalmente, un anticuerpo contra lo
que se quiere medir, y colocarlo en alguno de los soportes anteriormente mencionados.
Una vez solidificado el agar con elanticuerpo se hacen orificios y en ellos se coloca el antígeno
que desea probarse. Después de un periodo de 12, 24 o 48 hrs. de incubación, dependiendo de lo
que se este midiendo, se forman halos deprecipitación alrededor del orificio, este fenómeno se
debe a la formación de complejos antígeno-anticuerpo hasta llegar el momento de equivalencia en
el cual se produce el precipitado. El diámetro de la...