inmunofluerecencia

MÉTODO INDIRECTO INMUNOFLUERECENCIA


Se basan en que, cualquier antígeno, puede ser marcado específicamente con un fluorocromo coloreado, a través de un anticuerpo (ac) específico. cuando seirradia este elemento con luz ultravioleta o azul se hace fluorescente.
el antisuero (por ejemplo el de antisalmonela preparado en conejo) no se marca, sino que se emplea conjugado con sueroantiglobulina fluorescente, a través de una técnica en dos tiempos. la extensión con la bacteria en cuestión se “inunda” con el suero conejo antibacteriano. después de 10-30 minutos, el suero que no hayareaccionado se elimina mediante lavado, tratándose a continuación con globulina anticonejo fluorescente. las células bacterianas que hayan reaccionado con el antisuero, estarán revestidas con el anticuerpo(globulina) de conejo, y en consecuencia, reaccionarán con la globulina anticonejo marcada, de tal manera que se pueden identificar por la fluorescencia.

cuando es preciso detectar el antígeno, laelección entre estos métodos, están en parte determinada por el número de microorganismos diferentes, que hayan de ser identificados en la muestra, por ejemplo, los corpúsculos rábicos cerebrales sólotienen un antígeno, y en consecuencia, se debe emplear el método directo. los virus respiratorios de las secreciones tienen muchos antígenos, por lo que estaría más indicado el método indirecto, yaque, si no se hace así, sería preciso conjugar cada suero. si todos los antisueros empleados, en los métodos indirectos, se obtienen en el mismo huésped, únicamente será necesario un conjugadoantiespecie. El método indirecto es más sensible que el directo porque tiene mayor número de sitios para que se produzca la combinación, al mismo tiempo que, permite la identificación de anticuerposespecíficos. el isotiocianato de fluoresceína es el conjugado más empleado, presenta una banda de adsorción primaria de 495nm y produce la emisión verde a un máximo de 520nm.

PROCEDIMIENTO
Elaborar el...