isoterma de adsorción

Biotecnología Aplicada, Vol. 18, No. 1, March 2001, pp. 17-19
Determinación de los parámetros de la isoterma de adsorción para el sistema antígeno de superficie de la hepatitis B-anticuerpo monoclonal CB.Hep-1, en un gel de inmunoafinidad
Osmani Rodríguez Cardoso* 
Dirección de Producción, División de Hepatitis; 
Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología. Ave 31 e/ 158 y 190, Playa,Ciudad de La Habana. 
AP 6162, CP 10600, Cuba. Telf.: (53-7) 21 8164; Fax: (53-7) 21 8070; 

osmani.rodriguez@cigb.edu.cu
Gerardo García-Illera
Dirección de Calidad, División Analítica; 
Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología. Ave 31 e/ 158 y 190, Playa, Ciudad de La Habana. 
AP 6162, CP 10600, Cuba. Telf.: (53-7) 21 8164; Fax: (53-7) 21 8070; 

* Autor de correspondencia
Recibido enseptiembre del 2000. Aprobado en octubre del 2000
Code Number: BA01003
RESUMEN
El objetivo de este estudio fue comprobar si la isoterma de Langmuir es válida en el equilibrio para el sistema antígeno de superficie recombinante del virus de la hepatitis B-anticuerpo monoclonal CB.Hep-1, inmovilizado en una matriz de Sepharose CL-4B, y, en tal caso, determinar sus parámetros característicos. Eladsorbato se diluyó en tampón Tris 20 mM, EDTA 3 mM, NaCl 1 M, pH 7,2. Los experimentos se realizaron a 25 ºC. Se empleó el método batch para generar los datos de concentración de antígeno en la fase líquida en el equilibrio, y el balance de masa para calcular las concentraciones en la fase sólida en el equilibrio. Los ploteos de Scatchard, doble recíproco y semirecíproco reflejaron una dependencialineal, lo que indica un comportamiento según el modelo de Langmuir. En cada caso se obtuvo la recta de mejor ajuste por el método de los mínimos cuadrados. Los valores de la capacidad máxima del adsorbente y la constante de disociación, se obtuvieron de la ecuación de la recta ajustada mediante el ploteo semirecíproco, que fue el de mejores resultados. Con estos parámetros se representó laecuación de Langmuir gráficamente. Este resultado permite afirmar que la isoterma de Langmuir gobierna la interacción antígeno-ligando en el rango de concentración examinado.
Palabras claves: adsorción bioespecífica, CB.Hep-1, cromatografía de afinidad, HBsAg, isoterma de Langmuir, purificación de proteínas
ABSTRACT
Determination of the Adsorption Isotherm Parameters for the System Hepatitis BSurface Antigen–Monoclonal Antibody CB.Hep-1 on an Immunoaffinity Adsorbent. A study was performed in order to verify the possibility of using the Langmuir isotherm to describe the equilibrium behavior in the system recombinant Hepatitis B surface antigen–monoclonal antibody CB.Hep-1, immovilized in a Sepharose CL-4B matrix. The adsorbate was diluted in 20 mM Tris buffer containing 3 mM EDTA and 1 MNaCl, pH 7.2. The experiments were carried out at 25 ºC. Data of antigen equilibrium concentrations in the liquid phase were generated by the batch method and the equilibrium concentrations in the solid phase were calculated by mass balance. The Scatchard, double-reciprocal and semireciprocal plots showed a linear dependency, which indicates a behavior according to the Langmuirean model. In eachcase the data were fitted by least squares regression. The characteristic parameters of maximun adsorbent capacity and dissociation constant were obtained from the fit in the semireciprocal plot, which was the best, and used to chart the Langmuir equation. This result shows that the Langmuir isotherm governs the interaction antigen-ligand in the concentration range examined.
Keywords: affinitychromatography, biospecific adsorption, CB.Hep-1, HBsAg, Langmuir isotherm, protein purification
Introducción
El antígeno de superficie recombinante del virus de la hepatitis B (rHBsAg, por sus siglas en inglés) es el principio activo de la vacuna contra esta enfermedad. Es una proteína que se obtiene a partir de un cultivo de levaduras modificadas genéticamente como un agregado en forma de...