jesus berenice acevedo leon

Ingeniería y Tecnología

Artículo arbitrado

Método para la extracción de ADN
cloroplastídico de Bouteloua gracilis como
herramienta para aplicaciones moleculares
Method of chloroplast DNA extraction from Bouteloua
gracilis as a tool for molecular applications
DAVID I. HERNÁNDEZ-QUEZADA1, SIGIFREDO ARÉVALO-GALLEGOS1, DAVID A. BETANCOURT-GUERRA1,
ARMANDO AGUADO-SANTACRUZ2, TANIASIQUEIROS-CENDÓN1, BLANCA RIVERA-CHAVIRA1,
GUADALUPE VIRGINIA NEVÁREZ-MOORILLON1 Y QUINTÍN RASCÓN-CRUZ1,3
Recibido: Mayo 10, 2011

Aceptado: Octubre 24, 2011

Resumen

Abstract

La manipulación genética del genoma de cloroplasto esta a la
vanguardia en investigación biotecnológica. El pasto B. gracilis es
un modelo para el estudio de estrés hídrico y oxidativo, capacidades
relacionadas alcloroplasto. Es necesario tener un método que facilite
la obtención de ADN de buena calidad, particularmente cuando se
refiere al ADN de cloroplasto de B. gracilis. La implementación de
un método para la extracción de cpADN se logró probando diferentes
estrategias de extracción de cpADN reportados en la literatura y
combinando las etapas más apropiadas para B. gracilis. La
incorporación de unpaso adicional del lavado con CTAB permitió la
recuperación de cpDNA enriquecido, el cual se puede utilizar en el
desarrollo de hermanitas moleculares. Debido la implementación de
un protocolo de extracción también fue posible obtener una cantidad
considerable de cpADN de B. gracilis. El cpADN fue digerido con
varias enzimas de restricción y los fragmentos resultantes fueron
analizados porSouthern blot con las sondas de los genes de rADN
16S y 23S. Con base en los perfiles de restricción, en este trabajo
se reporta un mapa parcial de restricción del genoma del cloroplasto
de B. gracilis y se plantea que la metodología aquí establecida en un
futuro permitirá abordar la manipulación genética del genoma de
cloroplasto.

Genetic manipulation of the chloroplast genome is at theforefront
of biotechnology research. B. gracilis is a model for the study
of water stress and oxidative capacities related to the
chloroplast. It is requires a method to facilitate the obtaining of
good quality DNA, particularly when it comes to chloroplast
DNA of B. gracilis. The implementation of a method for extracting
cpDNA was achieved by assaying different strategies cpDNA
extractionreported in the literature and combining the most
appropriate stage for B. gracilis for cpDNA extraction. The
incorporation of an additional step of washing with CTAB after
lysis of chloroplasts, allowed the recovery of enriched cpDNA
which can be used in the development of molecular tools. Due
to the implementation of an extraction protocol was also possible
to obtain a considerable amount ofB. gracilis cpDNA. The cpDNA
was digested with several restriction enzymes and the resulting
fragments were analyzed by Southern blot with probes of genes
16S and 23S rDNA. The method developed allowed us to obtain
a considerable amount of cpDNA of B. gracilis which can be
cut with restriction enzymes and used for genetic mapping.
These results allow us in future work for the geneticmanipulation
of the chloroplast genome.

Palabras clave: Análisis molecular, clonación de genes, mapa
genético, transferencia horizontal de genes.

Keywords: Molecular analysis, gene cloning, gene mapping,
horizontal gene transfer
.

Introducción

L

as células de las plantas verdes y algunos protistas contienen organelos llamados
cloroplastos; estos organelos pueden convertir la luz enenergía química utilizable por el
organismo (Blaustein et al., 1998). Los cloroplastos son organelos intracelulares que
contienen la maquinaria necesaria para los procesos involucrados en la fotosíntesis. Estos
participan en la biosíntesis de aminoácidos, nucleótidos, lípidos y carbohidratos (Sugiura, 1992).
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Facultad de Ciencias Químicas. Universidad...