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Clonación molecular
La clonación molecular se utiliza en una amplia variedad de experimentos biológicos y las aplicaciones prácticas van desde la toma de huellas dactilares a producción deproteínas a gran escala.
En la práctica, con el fin de amplificar cualquier secuencia en un organismo vivo, la secuencia a clonar tiene que estar vinculada a un origen de replicación; que es una secuencia deADN.
Transfección

Se introduce la secuencia formada dentro de células.
Selección

Finalmente se seleccionan las células que han sido transfectadas con éxito con el nuevo ADN.
Inicialmente, elADN de interés necesita ser aislado de un segmento de ADN de tamaño adecuado. Posteriormente, se da el proceso de ligación cuando el fragmento amplificado se inserta en un vector de clonación: Elvector se linealiza (ya que es circular),usando enzimas de restricción y a continuación se incuban en condiciones adecuadas el fragmento de ADN de interés y el vector con la enzima ADN ligasa.
Laclonación molecular es una herramienta utilizada para la construcción de bibliotecas de ácido
desoxiribonucleico complementario (ADNc) y para la producción de proteínas de fusión.
La aplicación de antígenosexcreto-secretorios (ES) en lugar de antígenos crudos de larvas musculares en los ensayos de inmunoabsorbancia ligado a enzimas (ELISA) para el diagnóstico de la trichinellosis, mejoró laespecificidad y sensibilidad de la prueba (Gamble y col,1983).
La purificación de productos ES provenientes de cultivos de larvas musculares de Trichinella spp.
no permite obtener cantidades suficientes deproteínas para su utilización en pruebas inmunoenzimáticas.
Con el objetivo de mejorar esta contingencia se aplicaron las técnicas de clonación molecular.
Vassiilatis y col. en 1996 clonaron yexpresaron ADNc codificante para una glicoproteína secretoria de 43 kDa de T. spiralis. Yao y col. en 1997 obtubieron ADNc codificantes para ES con peso molecular de 46, 49/43 y 53 KDa de T. spiralis y...