Lab Anatomia e Histologia - practica6 corte

FUNDAMENTO
El corte histológico es la realización de delgadas secciones al tejido en bloque de parafina a través de un aparato conocido como micrótomo, las secciones son de espesor micrométrico que hacen al tejido translucido y mejor observable al microscopio. Una delgada tira de parafina que contiene la sección del tejido debe ser colocada en un portaobjetos con una gota de agua y calentado elportaobjetos, esto con el fin de que la parafina no se pliegue sino que se extienda y adhiera al portaobjetos. La calidad de imagen en la observación de un tejido al microscopio no sólo puede deberse a la fijación o al mismo microscopio, sino también a la calidad de corte realizado en el tejido, por eso es tan importante. Por lo general el siguiente paso después del corte en la técnicahistológica es la tinción.
MATERIAL
Cassette con el bloque de parafina
Cubreobjetos
Portaobjetos
Micrótomo
Cuchillas
Baño de flotación
Pincel del número 0
Papel periódico
Alcohol etílico
Sobre de papel
Plancha de enfriamiento
Plancha de calentamiento con termostato para fijar las preparaciones histológicas
Horno o estufa para desparafinado

METODOLOGÍA
Un día antes colocar los cassettesencima de llelos y a su vez llelos encima del cassette, esto en un recipiente, a su vez dentro de un congelador. El día de la práctica llevar los cassettes aun dentro de los recipientes con los llelos, sacar los cassettes y ponerlos encima de la plancha de enfriamiento, mientras esperamos que el agua del baño de flotación caliente lo suficiente. Una vez el baño de flotación esté listo, procedemos arealizar el corte en micrótomo
En el micrótomo retiramos el seguro de la manivela y también retiramos el seguro de donde debe ir la cuchilla, para colocar la cuchilla y una vez hecho esto, volver a colocar el seguro. Seleccionamos el grueso del corte a 5 micrómetros. Colocamos el cassette con bloque de parafina en el portabloques, para esto antes quitamos el seguro correspondiente y despuésvolvemos a poner. Adecuamos que tan hacia delante debe estar el portabloques para que esté cerca de 1 milimetro de la cuchilla. Después empezamos a mover la manivela para desplazar lentamente el portabloques, y al mismo tiempo hacemos presión sobre una pequeña palanca en el micrótomo que aumenta a 10 micrómetros el desplazamiento del portabloques por cada giro de la manivela, diseñado para aumentar elgrosor del corte 10 micrómetros más. Una vez llega el punto donde empieza a cortar el bloque de parafina, dejamos de presionar la palanca mencionada, pero seguimos moviendo la manivela. Esperamos hasta ver que las tiras de parafina generadas se vuelvan bien rectangulares y contengan tejido histológico en ellas, en ese momento tomamos una muestra del corte ayudado de un pincel y de la punta de undedo en el otro extremo y colocamos en el baño de flotación.
Una vez esté el corte de parafina en el baño de flotación, atrapamos el corte con un portaobjetos, sumergiéndolo y sacándolo junto con este. El baño de flotación tiene la función de alisar el corte de parafina para quitarle la mayor parte de pliegues que presente y dejarlo pegado al portaobjetos, otra opción para esto es colocarloinmediatamente en el portaobjetos y hacer pasar un poco de alcohol etílico por entre el corte de parafina y el portaobjetos. El papel periódico sirve para limpiar del baño de flotación las muestras sin utilidad que quedaron flotando. Luego le ponemos nuestras iniciales al portaobjetos con un lápiz punta de diamante y lo dejamos en un lugar adecuado para que escurra el agua y/o el alcohol. Una veztengamos el corte de parafina en el portaobjetos casi seco, pero no completamente para que no se despegue, lo pasamos a una plancha de calentamiento con termostato para fijar aun mejor el corte, a 56-58 ºC. Luego pasamos el corte histológico a un horno o estufa para desparafinarlo a 60ºC durante 30 minutos. Al final guardamos el portaobjetos con el corte histológico presente y su cubreobjetos en un...