Lab moscas transgenicas

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TEMA: Laboratorio de moscas transgénicas virtual

OBJETIVOS

* Comprender cómo se utiliza la tecnología recombinante ADN para producir moscas transgénicas.
* Uso de baja producción como marcador externo del interno eventos moleculares.
* Explorar la relación entre los genes y el comportamiento.
* Comprender cómo los organismos transgénicos pueden ser utilizados para explorarcomplejos procesos biológicos.
* Aprenda que todos los organismos contienen un reloj interno que regula moleculares ritmos diarios.

(Bruns P., Liu D., Donna M., Amagai S., Darlington T., et al. 2010).

INTRODUCCIÓN

El laboratorio permite familiarizarse con la ciencia y las técnicas utilizadas para hacer moscas transgénicas. Los organismos transgénicos, que contienen ADN que se insertade forma experimental, se utilizan para estudiar muchos procesos biológicos. En este laboratorio, se creará una mosca transgénicos para estudiar los ritmos circadianos. La mosca se ilumina sólo cuando un gen implicado en los ritmos circadianos se activa. Después de hacer la marcha brillante, lo va a usar para explorar los principios básicos de la biología circadiana y la genética (Bruns P., LiuD., Donna M., Amagai S., Darlington T., et al. 2010).

HIPÓTESIS: La presencia de la por luc construcción de ADN en las células de la mosca daría lugar a la emisión de luz que reflejan la actividad transcripcional del período de gen.

MATERIALES
* placa de agar.
* Anesthetizer
* Caja de bioluminiscencia
* Cepillo
* microscopio de disección
* filtro
* cilindrocolección.
* embriones.
* aguja de cristal del tubo capilar.
* bomba de inyección
* microscopio invertido.
* micromanipulador.
* micropipeta.
* tubo de micropipeta
* placa de 96 pocillos.
* matraz.
* la botella de agua.

PROCEDIMIENTO
Parte 1: Preparación de ADN que se incorporarán en el genoma de la mosca
* Paso 1: ADN
Una gran parte de la investigación yla experimentación son necesarias para preparar correctamente el ADN que se inyecta en el Drosophila (Mosca de la fruta) los embriones. Se determinan segmentos pequeños de ADN, cada una con una función crítica, se empalman entre sí para formar el constructo de ADN. (Bruns P., Liu D., Donna M., Amagai S., Darlington T., et al. 2010).

Construir y fuentes transposasa ADN
Las enzimas derestricción se utilizan para cortar el fuego volar secuencia de ADN que codifica para la luciferasa (LUC), enzima, resultando en una secuencia de 2.7 kb DNA de la enzima luciferasa.
El por animador (PER) está aislado y corte de la Drosophila (mosca de fuego no) de ADN, lo que resulta en un segmento de 4,2 kb de cada secuencia del promotor.

La secuencia de ADN mini blanco se corta de un segmentodiferente del ADN de Drosophila.
Drosophila ADN (P elemento) se corta y se separaron en la enzima transposasa ayudante y dos segmentos cortos de ADN (P) que facilitan la integración de esta construcción artificial en el genoma de la mosca.
Reordenamiento: Los segmentos de ADN se reorganizan en el orden correcto, ligados juntos, y se inserta en un vector plásmido circular. Tenga en cuenta que esPOR aguas arriba (a la izquierda) de la LUC. PER (el promotor) que regulan la expresión de la LUC.
Transposasa ADN también se ligó en un vector plásmido circular.
(Bruns P., Liu D., Donna M., Amagai S., Darlington T., et al. 2010).

* Paso 2: la aguja de la inyección de relleno de vidrio

Ahora la solución de ADN deben ser cuidadosamente insertado en una aguja de vidrio. La fabricaciónde esta aguja es en realidad un paso crítico en el éxito o el fracaso del experimento. La aguja que contiene la solución de ADN se une a un tubo conectado a una bomba. La bomba con precaución cuando se regula la solución de ADN se expulsa en el embrión. La aguja se fija en un micromanipulador con controles que le permitirán mover la aguja en incrementos muy pequeños en la posición correcta....
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