Laboratorio De Ciencia Básica III Cromatografia Grupo 2

Laboratorio de Ciencia
Básica III

Cromatografía: Separación y
Extracción de pigmentos
Vegetales.

Cromatografía

• Método de separación de una mezcla de dos o más
compuestos entre dos fases inmiscibles: una fase móvil, que
transporta las sustancias que se separan y que progresa en
acción con la otra, denominada fase estacionaria que sirve
como adsorbente del eluyente. De forma general,consiste
en pasar una fase móvil a través de una fase estacionaria
fija sólida, donde dicho movimiento, estará determinado por
las afinidades polares de los pigmentos con el eleyente(fase
móvil) y el adsorbente (fase estacionaria).

Cromatografías dependiendo la
naturaleza de las fases involucradas
• Cromatografía líquida.
La fase móvil es un disolvente o mezcla de disolventes y la fase
estacionaria unsólido que interactúa con las sustancias que se
desea separar (cromatografía líquido-sólido), o bien un líquido
inmiscible con la fase móvil, depositado en la superficie de un
sólido

(cromatografía

cromatografía

puede

líquido-líquido).
realizarse

con

Esta

forma

diferentes

experimentales: en columna, en capa delgada o en papel.

de

arreglos

Cromatografías dependiendo la
naturaleza delas fases involucradas
• Cromatografía de Gases
En este caso la fase móvil es un gas inerte (helio o nitrógeno) y la
fase estacionaria es un sólido (cromatografía gas-sólido) o un
líquido “sostenido” por un sólido inerte (cromatografía gaslíquido). Este tipo de cromatografía siempre es en columna, ya
que es la única manera de que la fase móvil gaseosa se mantenga
fluyendo, confinada dentro delsistema.

Cromatografía en Capa Fina
• La cromatografía en capa fina se basa en la preparación de una
capa, uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de
vidrio u otro soporte. Los requisitos esenciales son, pues, un
adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo que mantenga las
placas durante la extensión, otro para aplicar la capa de
adsorbente, y una cámara en la que se desarrollen lasplacas
cubiertas. Es preciso también poder guardar con facilidad las
placas preparadas y una estufa para activarlas

Cromatografía en Capa Fina
• Ventajas:
• La cromatografía en capa fina presenta

una serie de ventajas frente a otros
métodos cromatográficos (en columna,
en papel, en fase gaseosa) ya que el
material que precisa es más simple. El
tiempo que se necesita para conseguir
lasseparaciones es mucho menor y la
separación

es

generalmente

mejor.

Pueden usarse reveladores corrosivos,
que

sobre

papel

destruirían

el

cromatograma. El método es simple y
los

resultados

son

fácilmente

reproducibles, lo que hace que sea un
método adecuado para fines analíticos.

Cromatografía en Capa Fina
• Usos de la CCF
La CCF es usada frecuentemente a nivel industrial para pruebaspreliminares a la cromatografía en columna, ya que en ésta
técnica podemos identificar los compuestos una vez separados.
La C.C.F. se realiza con material muy básico, a comparación de la
C.C., aparte de ser rápida, económica y se muestra mejor la
separación.

Cromatografía en Capa Fina
• Concepto de Rf
La relación de las distancias
recorridas
compuesto

por
y

por

el
el

disolvente, desde el puntode

origen

del

cromatograma, se conoce
como Rf, el cual posee un
valor constante para cada
compuesto en condiciones
determinadas.

Cromatografía en Capa Fina
• Reveladores
• La mayor parte de las placas de cromatografía llevan

un indicador

fluorescente que permite la visualización de los compuestos activos a la luz
ultravioleta El indicador absorbe la luz UV y emite luz visible. La presenciade
un compuesto activo en el UV evita que el indicador absorba la luz en la zona
en la que se encuentra el producto, y el resultado es la visualización de una
mancha en la placa que indica la presencia de un compuesto. En el caso de
compuestos que no absorben luz UV, la visualización (o revelado) del
cromatograma requiere utilizar un agente revelador. Este tiene que reaccionar
con los productos...