Laboratorio De Dna De Electroforesis

Electroforesis de DNA aplicación en la ciencias forenses

Propósito
1. Tomar rol del científico forenses para investigar un caso criminal.
2. Saber y aprender a identificar el DNA de un asesinó.
3. Aprender la función de la enzima de restricción en los fragmentos del DNA.
4. Aprender a prepara una gel de electroforesis de agarosa.
5. Preparar una electroforesis de agarosay correr muestra de DNA.
6. Comparar la evidencia de la muestra de DNA de los sospechosos con la escena del crimen.
Introducción
La gel de agarosa nos permite separar moléculas a base de su peso molecular. Esta técnica es muy importante en el estudio del DNA para la ciencia forense. En este laboratorio utilizamos la electroforesis de agarosa para separar la muestra del DNA de los cincosospechosos de la escena de un crimen realizado en el estacionamiento de la universidad interamericana recinto de Bayamón. La agarosa es un polímero altamente purificado del agar y esta compuesto enteramente de azúcar. Es utilizado para darle consistencia cremosa al mantecado y a otros alimentos. Nosotros utilizamos la agarosa porque, una solución de agua y agarosa, forma un gel a temperaturaambiente. Las moléculas de DNA pueden moverse a través del gel de agarosa siempre y cuando pasemos corriente por la cámara de electroforesis. Las moléculas grandes de alto pesos moleculares se mueven más lentamente que las pequeñas de bajo pesos moleculares.
La electroforesis es un proceso que usa electricidad en voltio para empujar la molecular de un sitio a otro. Si observamos la cámara del gelnotamos dos alambres llamado electrodo. Uno esta conectado a una barra roja y es el polo positivo, y el otro esta conectado a una barra negra y este es el polo negativo. Debidos a que el DNA es una molécula con carga negativa se sentirá atraídos hacia el polo positivo. En esta práctica comparamos las bandas producidas por una muestra que representa el DNA recogido en la escena del crimen, y cincomuestras obtenidas de sospechosos en el caso. Dado que el DNA se encuentra en cada célula dentro del cuerpo de una persona, la evidencia de DNA puede venir de cualquier parte de una persona que se quede atrás en la escena de un crimen. Pudimos utilizar muestra del DNA colectados en la escena del crimen que nos permitió identificar y vincular a un sospechoso. Para degradar y corta el DNA genomicoutilizamos la enzima de restricción. Las enzimas de restricción se sitúan en la molécula de DNA y se desplazan por la hélice hasta que reconocen unas secuencias específicas de pares de bases que indican a la enzima que deje de desplazarse. Las enzimas entonces digieren la molécula de DNA en ese punto llamado diana de restricción actuando como tijeras moleculares, cortando el DNA por secuenciasespecíficas de pares de bases. Si existe más de una diana de restricción en una molécula de DNA, la enzima de restricción cortará en cada uno de esos sitios, obteniéndose múltiples fragmentos.
Así, si un fragmento lineal de DNA se corta con una enzima de restricción cuya diana de restricción se encuentra en dos puntos diferentes de la molécula de DNA, se obtendrán tres fragmentos de diferenteslongitudes. La longitud de cada fragmento dependerá de la localización de las dianas de restricción en la molécula de DNA. Cuando las enzimas de restricción se usan para cortar cadenas de DNA plasmídico circular, se obtienen fragmentos de DNA de varios tamaños. El DNA cortado con enzimas de restricción puede ser separado y observado utilizando con la técnica de electroforesis en gel de agarosa. Lasencargada de la secuencias de reconocimiento son dos enzimas llamaba, EcoRI y PstI. Como todas las enzimas, las enzimas de restricción funcionan mejor con un buffer y a una temperatura específica. El buffer apropiado para las enzimas de restricción se incluye con la muestra de DNA, de manera que cuando el DNA rehidratado y las enzimas se mezclan, se crean las condiciones ideales para el óptimo...