laboratorio ureasa

EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA UREASA

Leydi Mariana Cortez Escarraga Cód: 070150602012 Programa de Biología
Anyi Camila Zabala Hernández Cód: 070150302012 Universidad del Tolima


RESULTADOS OBTENIDOS

• Determinación del pH óptimo
Tabla 1. Datos obtenidos para la titulación del amoniaco


Tubo mLHCl blanco mLHCl problemaTitulación corregida μmol de urea
1 1,2 15 13,8 690
2 3,7 20 16,3 815

3 1,8 25 23,2 1160

4 3,5 12 8,5 425

5 4,3 12 7,7 385


• Gráfica 1. µmol de urea hidrolizada vs pH














• Tabla 2. Efecto de la concentración del sustrato con la velocidad de la reacción enzimática.

Tubo mLHCl blanco mLHCl problema Titulación corregida μmol de urea
8,3 ---
1 ---20,4 12,1 402,6
2 --- 20,6 12,3 411,75
3 --- 21,2 12,9 398,94
4 --- 22 13,7 386,13
6 --- 29,2 20,9 431,88
7 --- 31 22,7 415,41



• Grafica 2. µmol de urea hidrolizada por minuto [V] VS concentración de urea en µmol de urea [S] iniciales/mL.














• Determinación de la constante de Michaelis-Menten (KM)

Y=0,0361X+7,5809
Y=mx + b
Donde :
y = 1
V0

mx=Km
Vmàx

b= 1
Vmàx
Para calcular km:
Vmax= 1
7,5809

Vmax= 0,1319 µmoles/min

Km=0,0361
Vmax

Km=(0,0361min/mililitro)x(0,1319µmoles/min)
Km=4,7615x10-3µmoles/mililitro

• Determine qué tipo de inhibidor es el HgCl2.

El HgCl2 en un inhibidor que impide la acción enzimática de la ureasa sobre la urea esta unión puede ser reversible o irreversible.Normalmente, los inhibidores irreversibles reaccionan con la enzima de forma covalente y modifican su estructura química a nivel de residuos esenciales de los aminoácidos necesarios para la actividad enzimática. En cambio, los inhibidores reversibles se unen a la enzima de forma no covalente, dando lugar a diferentes tipos de inhibiciones, dependiendo de si el inhibidor se une a la enzima, al complejoenzima sustrato o a ambos
Los inhibidores reversibles se unen a las enzimas mediante interacciones no covalentes tales como los puentes de hidrógeno, las interacciones hidrofóbicas y los enlaces iónicos. Los enlaces débiles múltiples entre el inhibidor y el sitio activo se combinan para producir una unión fuerte y específica. Al contrario de lo que ocurre con el sustrato y los inhibidoresirreversibles, los inhibidores reversibles generalmente no experimentan reacciones químicas cuando se unen a la enzima y pueden ser eliminados fácilmente por dilución o por diálisis.
Pero por otro lado los inhibidores irreversibles o también conocidos como venenos enzimáticos tienen este nombre debido a que lo que hacen es unirse a la enzima de forma covalente y así la enzima no puede volver a actuarnunca más, ya tiene que ser degradado. Como en el caso de la ureasa que se utiliza cloruro de mercurio, donde los grupos mercurio de estos compuestos reaccionan con los grupos SH de ciertas enzimas uniéndose el Hg de forma covalente a estos grupos SH e impidiendo que la enzima pueda actuar.
Para que esto ocurra pueden darse dos cosas: una puede ser que el inhibidor se una a la enzima directamente oque se una ya al complejo enzima-sustrato, pero independientemente de cómo sea se va a dar una inhibición irreversible.

• Describa cual es el papel de la ureasa en el ciclo del nitrógeno
Cierto tipo de bacterias y otros organismos como las algas cianoficeas fijan nitrógeno convirtiendo el N2 en otras formas químicas como nitratos y amonio que son maneras asimilables por las plantas. En el casodel metabolismo de los compuestos nitrogenados en animales termina formándose el ión amonio que es muy tóxico y debe ser eliminado. Este proceso de eliminación se hace en forma de amoniaco, úrea o de ácido úrico, en este punto es donde entra a actuar la ureasa catalizando este tipo de procesos.



ANALISIS DE RESULTADOS
La gráfica 1 nos permite observar que la mayor cantidad de úrea...