Ley De Lamber

Universidad Central de Chile
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Enfermería
Cátedra de Integrado Bioquímica Celular

Laboratorio de Bioquímica
Cuantificación de ProteínasObjetivos de la Práctica:
* Comprender los conceptos de absorción de luz de una sustancia.
* Familiarizarse con el manejo de un espectrofotómetro.
* Realizar una curva de calibración para lacuantificación de proteínas por el método de Biuret.
* Determinar la concentración de proteínas plasmáticas mediante extrapolación en la curva de calibración obtenida.

Fundamento Teórico:

Ladeterminación colorimétrica cuantitativa de una sustancia se basa en la capacidad de ésta para absorber selectivamente ciertas longitudes de onda de la luz incidente. La cantidad de luz absorbida esdirectamente proporcional al espesor del medio y a la concentración de la sustancia presente. De esta manera, si se mantiene constante el espesor del medio, la absorción de luz por unasustancia disuelta en un medio transparente (Ej agua) será proporcional a su concentración molar.

Estos principios están contenidos en las leyes de Lambert – Beer y están expresadas en la siguienteecuación:

donde A es la Absorbancia de la sustancia, e es el coeficiente de extinción molar, C es la concentración e l es el espesor de la solución, siendo éste último igual a 1 cm. El coeficiente e seexpresa en litros/M cm y es numéricamente igual a la A de una solución 1M (1 Molar) de concentración.

Si las sustancias siguen la ley de Lambert-Beer, presentan una relación lineal entre A yconcentración. Por otro lado si la relación entre A y concentración es lineal para dos soluciones de la misma sustancia a igual espesor y longitud de onda, entonces se puede usar una de ellas deconcentración conocida (estándar) para determinar la concentración de la otra solución.

En la práctica para determinar espectrofotométricamente la concentración de una sustancia se requiere: a) una...