Licenciado en Química

CÁLCULO DE INCERTIDUMBRE EN MEDIDAS QUÍMICAS:
ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO
Alicia Maroto, Ricard Boqué, Jordi Riu, F. Xavier Rius
Departamento de Química Analítica y Química Orgánica
Instituto de Estudios Avanzados. Universitat Rovira i Virgili.
Pl. Imperial Tàrraco, 1. 43005-Tarragona. España

En anteriores artículos de esta serie hemos visto la importancia que tiene
calcular la incertidumbreasociada a cualquier resultado analítico [Maroto 2001]
así como las diversas estrategias existentes para calcular la incertidumbre
[Maroto 2002]. Una de ellas consiste en calcularla de forma global, es decir,
agrupando términos de incertidumbre siempre que sea posible, y utilizando la
información que se genera durante el proceso de validación del método
analítico [Maroto 1999]. La ventaja deesta aproximación es que requiere poco
trabajo adicional puesto que los métodos siempre deben validarse antes de
aplicarlos al análisis de muestras de rutina. En este artículo se explica cómo
aplicar esta aproximación para calcular la incertidumbre en la determinación de
clembuterol en hígado mediante cromatografía líquida de alta resolución
(HPLC).
1. Determinación de clembuterol en hígadomediante HPLC
El consumo de carne de animales tratados con elevadas cantidades de
clembuterol puede comportar la aparición de efectos graves en el consumidor,
como alteraciones de tiroides, palpitaciones, insomnio, espasmos musculares,
aumento de la presión sanguínea, etc. Por este motivo, la comunidad europea
ha establecido un límite máximo de clembuterol de 0.1 µg/Kg en músculo, de
0.5µg/Kg en hígado y riñón, y de 0.05 µg/L en leche. El uso del clembuterol
administrado como fármaco de forma terapéutica y bajo prescripción veterinaria
comporta un riesgo mínimo para el consumidor. Sin embargo, el uso ilegal del
clembuterol en animales como anabolizante para aumentar la cantidad de
músculo puede dar lugar a graves intoxicaciones. Los graves efectos del
clembuterol han hecho quesea muy importante determinar su contenido en
carnes y, especialmente, en hígado ya que es donde se encuentran las
mayores concentraciones. La Figura 1 muestra las etapas del método analítico
para determinar clembuterol en hígado.

1

Eliminar las partes visibles
de grasa del hígado
Triturar y homogeneizar
10 g de hígado

Centrifugar

Extracción en fase sólida
del sobrenadanteExtracción con
tercbutilmetiléter

F=1

HPLC
HPLC

Determinación del
clembuterol por HPLC

Vial 1

Figura 1. Etapas del método analítico para determinar clembuterol en
hígado por análisis cromatográfico.

En primer lugar, se deben triturar y homogeneizar 10 g de hígado después de
haber eliminado las partes visibles de grasa. Una vez homogeneizada, la
muestra se centrifuga y serealiza una extracción en fase sólida del
sobrenadante con un cartucho C18. El clembuterol retenido en el cartucho se
eluye con metanol. Después, deben realizarse diversas extracciones con
tercbutilmetiléter, evaporar a sequedad la fase orgánica y disolver el residuo en
ácido clorhídrico 0.01 M. Finalmente, se determina el clembuterol del extracto
mediante HPLC. La concentración final declembuterol en hígado (expresada
en µg/Kg) se calcula como:
c clembutero l =

cHPLC ⋅Vex
·F
R ⋅ mhígado hom

[1]

donde cHPLC es la concentración del extracto analizado por HPLC (en µg/L), Vex
es el volumen final del extracto (en L), R es la recuperación del proceso de
extracción, m hígado es la masa de hígado analizada (en Kg), Fhom es el factor
debido a la heterogeneidad de la muestra. Aefectos prácticos, se asume que
Fhom es igual a uno y por tanto no contribuye al resultado final. No obstante,
Fhom tiene una incertidumbre asociada que sí contribuye a la incertidumbre final
de los resultados.

2

2. Verificación de la trazabilidad de los resultados
La trazabilidad del contenido en clembuterol puede verificarse utilizando un
material de referencia certificado (CRM) [BCR...