LIPIDOS

UNIVERSIDAD DE SUCRE / FACULTAD DE EDUCACION Y CIENCIAS / DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA / PRACTICAS DE BIOQUIMICA I - PROGRAMA DE BIOLOGÍA 2013
EXPERIENCIA # 5
gIDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS
INTRODUCCION
Los lípidos biológicos integran un grupo de moléculas orgánicas diversas que se caracterizan por su solubilidad en solventes orgánicos como cloroformo, benceno y otros. Entre las funciones se puedenmencionar: Reserva energética (aceites, grasas, ceras), moléculas que hacen parte de la estructura de las biomembranas (fosfolípidos, glucolípidos, lípidos éter en Archaea, esfingolípidos y esteroles); finalmente, entre un 5% a 10% actúan como cofactores enzimáticos, transporte de electrones, emulsionantes, hormonas mensajeros intracelulares y vitaminas liposolubles. Los lípidos por su estructurason moléculas insolubles en un ambiente acuoso, por lo tanto para su reconocimiento, extracción e identificación se requiere de métodos y solventes orgánicos que son poco usados para los estudios de carbohidratos, proteínas y ácidos nucleicos; en consecuencia, entre los métodos mas comunes se encuentran las pruebas de: Solubilidad, tinción (Prueba de Sudán), saponificación, instauración (Prueba deYodo), para la glicerina (Prueba de acroleína), glicerol, fusión (presencia de fósforo inorgánico), valor de acidez, reacción de Lieberman; asimismo. Los lípidos se pueden extraer con éter etílico, cloroformo, benceno, etanol, metanol y se separan mediante cromatografía de capa fina, adsorción, gas-líquido, cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), finalmente la espectrofotometría de masasrevela la estructura molecular del lípido en forma completa.
OBJETIVOS
• Identificar la presencia de lípidos de origen vegetal y animal.
• Cada grupo elabora los objetivos específicos y los presenta al inicio del laboratorio.
HIPOTESIS
Cada grupo elabora la hipótesis correspondiente y la presenta al inicio del laboratorio.
MATERIALES, REACTIVOS y EQUIPOS
POR GRUPO
- 2 Pipetas graduadas de2 y 5 ml. - 6 tubos de ensayo por grupo.
- 6 tapones para los tubos de ensayo. - 1 pinza para tubos de ensayo.
- 1 Beaker de 50 o 100 ml. - Gradilla para los tubos de ensayo.
- Aceite vegetal. - Grasa animal usada.
- Leche
• DE USO COMÚN
- 4 Baños de agua hirviendo para el experimento. - 4 Mecheros - Soluciones de sacarosa 1% p/v. - Tinta china roja. - Cloroformo. - Éter. -Solución alcohólica de Sudán III.
PROCEDIMIENTOS
1. PRUEBA DE SOLUBILIDAD
En cuatro tubos de ensayo desarrolle el siguiente procedimiento:
- Tubo 1: 2 ml de aceite vegetal y agregue 2 ml de agua.
- Tubo 2: 1 ml de aceite vegetal y agregue 1 ml de éter o cloroformo
- Tubo 3: 1 ml de grasa animal usada y agregue 1 ml de agua.
- Tubo 4: 1 ml de grasa animal usada o no y agregue 1 ml de éter ocloroformo.
Agitar en forma muy fuerte y deje reposar. Observe y anote los resultados.
• ENSAYO DE TINCIÓN
En cuatro tubos de ensayo desarrolle el siguiente procedimiento:
- Tubo 1: 2 ml de aceite vegetal y añada 0.25 ml de solución alcohólica de Sudán III.
- Tubo 2: 1 ml de grasa animal usada más 0.25 ml de solución alcohólica de Sudán III.
- Tubo 3: 1 ml de leche y añada 0.25 ml desolución alcohólica de Sudán III.
- Tubo 4: 1 ml de aceite vegetal agregue 0.25 ml de tinta roja.
• SAPONIFICACIÓN
•En cuatro tubos de ensayo desarrolle el siguiente procedimiento:
- Tubo 1: 2 ml de aceite vegetal y añada 2 ml de una solución de NaOH 20% p/v.
- Tubo 2: 2 ml de grasa animal usada más 2 ml de una solución de NaOH 20% p/v.
- Tubo 3: 2 ml de leche y añada 2 ml de una solución deNaOH 20% p/v.
Agitar fuertemente y ubicar los tubos en un baño de María por 20 a 30 minutos.
Después del tiempo anterior (20 a 30 minutos), observe la formación de varias capas.
• ENSAYO DE LIEBERMAN-BURCHARD
- En un beaker se colocan 10 ml de cloroformo y se le agrega 1 ml de yema de huevo.
- A un tubo de ensayo seco se le adiciona 1 ml de la solución anterior; posteriormente, se adiciona...