Lipidos

PRACTICA Nº 05
HIDRÓLISIS ENZIMATICA DE LÍPIDOS

INTRODUCCIÓN

Las lipasas y las esterasas catalizan la hidrólisis de enlaces éster que se encuentran en un gran número de lípidos saponificables. Estas enzimas están ampliamente distribuidas en la naturaleza y son especialmente importantes en el tracto gastrointestinal donde funcionan en la digestión y absorción de grasas.

Debido a que lasgrasas no son solubles en agua, las enzimas deben actuar en la interfase lípido-agua, lo cual trae como consecuencia una disminución de la actividad enzimática.

Consecuentemente, será necesario el empleo de los agentes emulsificantes tales como las sales biliares que producen a menudo una estimulación marcada de la hidrólisis enzimática de los lípidos, debido al incremento de la interfaselípido-agua. En la leche homogeneizada los glóbulos de grasa están en un estado muy finamente dividido y este material sirve como sustrato excelente para las lipasas. En este experimento se emplea como enzima una lipasa muy potente que se encuentra en el páncreas desecado.

OBJETIVO:

Demostrar la acción de la lipasa pancreática en presencia y ausencia de bilis.

MATERIAL:

• Tubos 17 x150ml
• Propipeta
• Gradilla
• Bagueta
• 1 pipeta de 5ml
• 1 Pipeta de 1 ml
• 1 Pipeta de 10 ml
• Baño maría a 37º C

REACTIVOS:

• Pancreatina al 2%
• Aceite de oliva
• KOH 0.1N
• Fenolftaleína
• Buffer fosfato pH 8
• Bilis en Buffer pH 8
• Agua destilada

PROCEDIMIENTO
Disponer una serie de 3 tubos de ensayo y proceder de la siguiente manera

Reactivo / Tubos Nº| 1 | 2 | 3 |
Aceite de oliva neutralizado (mL) | 1 | 1 | -- |
Buffer pH 8. 0 (mL) | - | 2 | 2 |
Sales biliares en buffer pH8 (mL) | 2 | -- | 2 |
Agua destilada (mL) | 2 | 2 | 1 |

Antes de agregar la solución de pancreatinina, debemos estar seguros de que no haya acidez libre en el medio que estamos preparando, para lo cual debemos emulsionar bien cada tubo y si el color rosado delindicador (fenolftaleína) no se mantiene, nos indica acidez en el medio de proceso; se añade unas gotas de KOH 0.1N, cuidando del exceso.

Solución de pancreatina (mL) | 5 | 5 | 5 |

Reactivos

Agitar y deje incubando durante 20 minutos a 37º C.

Se comenzó colocando en 3 tubos de ensayo los reactivos antes nombrados en el recuadro superior, con sus diferentes medidas y cantidades.Luego mesclamos y agitamos los tubos de ensayo para crear un grado de excitación para que se mesclen y se cree una acidez.



Luego de mesclar los reactivos, se continúo con agregar el Hidróxido de potasio (KOH) esto para lograr cambiar el pH de ácido a básico. Al agregarlo se noto un colocar rosado que indicaba la reacción.

A continuación se llevó a baño de maría los tres tubos de ensayodurante 20 minutos y así observar como metaboliza el lípido.

Pasado 20 minutos.



Y para finalizar se medio con cintas de pH el nivel de pH que tenían.

Cintas



RESULTADOS

Durante este tiempo la enzima libera los ácidos grasos del aceite que acidifican el medio, esto hace virar al indicador hacia la zona ácida.
En el tubo que no contiene sales liberadas, la reacción habrásido más lenta que la del primer tubo, y en el que no contiene aceite de pepita no habrá ninguna acidez.

CUESTIONARIO

1.- Cuál es el origen de la pancreatina empleada en la práctica.

La pancreatina es una mezcla de las enzimas digestivas presentes de forma natural en los intestinos. Las enzimas digestivas son proteínas complejas que participan en la digestión y que producen cambios químicosen otras sustancias. Funcionan de manera óptima a una temperatura y un pH específicos. Las enzimas digestivas incluyen las enzimas pancreáticas, las enzimas de origen vegetal y las enzimas derivadas de hongos. Hay tres clases de enzimas digestivas: enzimas proteolíticas, necesarias para digerir las proteínas, lipasas, necesarias para digerir las grasas, y amilasas, necesarias para digerir los...