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UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID
FACULTAD DE FARMACIA
Departamento de Parasitología

AMEBIASIS EN ESPAÑA: DIAGNÓSTICO MOLECULAR
Y ESTUDIO EPIDEMIOLÓGICO DE UNA PARASITOSIS
EMERGENTE

MEMORIA PARA OPTAR AL GRADO DE DOCTOR
PRESENTADA POR

María José Gutiérrez Cisneros

Bajo la dirección de las doctoras
Teresa Gárate Ormaechea e Isabel de Fuentes Corripio

Madrid, 2008

• ISBN:978-84-692-0156-5

UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID

FACULTAD DE FARMACIA
DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGÍA

TESIS DOCTORAL

AMEBIASIS EN ESPAÑA: DIAGNÓSTICO MOLECULAR Y
ESTUDIO EPIDEMIOLÓGICO DE UNA PARASITOSIS
EMERGENTE

Mª JOSÉ GUTIÉRREZ CISNEROS
MADRID 2007

ÍNDICEINTRODUCCIÓN............................................................................................................ 1
1. Conceptos generales y taxonomía..........................................................................2
2. Ciclo biológico y ultraestructura..............................................................................5
2.1. Ciclo biológico.................................................................................................................5
2.2. Trofozoíto.........................................................................................................................6
2.3. Quiste ................................................................................................................................8
3. Epidemiología .....................................................................................................................8
4.Manifestaciones clínicas de la amebiasis .........................................................12
5. Diagnóstico de laboratorio........................................................................................14
5.1. Microscopía ....................................................................................................................15
5.2. Cultivo.............................................................................................................................18
5.3. Análisis isoenzimático................................................................................................20
5.4. Detección de anticuerpos .........................................................................................21
5.5. Detección de antígeno en heces(Coproantígeno)..........................................23
5.6. Análisis de ADN............................................................................................................25
5.7. Métodos de caracterización .....................................................................................29
OBJETIVOS................................................................................................................... 34
HIPÓTESIS Y OBJETIVOS ................................................................................................35
MATERIAL Y MÉTODOS ............................................................................................ 36
1. Desarrollo y validación de una técnica de PCR con aplicación para el
diagnóstico y diferenciación de E. histolytica y E.dispar.............................37
1.1. Optimización de las condiciones de trabajo para una nested-PCR ..........37
1.2. Determinación de la sensibilidad de la nested-PCR con ADN de E.
histolytica y E. dispar procedente de cultivo axénico.............................................40
1.3. Estudio de especificidad con otros parásitos ....................................................40
1.4.Elección del método de extracción de ADN a partir de muestras
biológicas .................................................................................................................................41
1.4.1. Extracción de ADN con tiocianato de guanidina ......................................41
1.4.2. Extracción de ADN con un método comercial...........................................42

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