Métodos Básicos Para El Aislamiento E Identificación De Enterobacterias Del Agua.

Reporte de la práctica de laboratorio
Trimestre 11/O

Procesos Celulares Fundamentales

Métodos básicos para el aislamiento e identificación de Enterobacterias del agua.

Fecha de entrega: 28-Mayo-2012

OBJETIVO GENERAL
El objetivo de la presente práctica de laboratorio es aprender el manejo de los métodos básicos empleados en el laboratorio de microbiología, para la identificaciónde Enterobacterias de muestras el agua obtenida de un comercio de pollos muertos, para el consumo humano. Muestra 1: agua que contienen los pollos en las cajas de traslado, muestra 2: agua conque enjuagan el pollo antes de venderlo, muestra 3: agua con la que lavan los trapos al momento de limpiar el área de venta. Estas muestras se prepararan y se aprenderá a sembrarla por estría cruzada paraobtener colonias asiladas (tomando como modelo las muestras de agua contaminada), observándolas y determinando sus características macroscópicas y microscópicas, y obtener cultivos puros; para realizar las pruebas bioquímicas, para su interpretación, identificación y conocimiento de características e implicaciones epidemiológicas de cada Enterobacterias aisladas de nuestras muestras de agua.DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
1. Preparación de la zona estéril

Se lavo con agua y jabón la superficie de la mesa de laboratorio. Se dejó secar y desinfecto con la solución de hipoclorito de sodio al 10%. Colocamos el mechero sobre la mesa y dejamos secar la mesa.
Trabajamos en la zona estéril que abarca un diámetro aproximado de 20 cm alrededor de la flama del mechero.
Es importantemencionar que en todo momento se trabajó dentro de la zona estéril

1.1. Cultivo de la muestra de agua en el medio MacConkey
Es importante mencionar que las muestras sembradas en el medio fuero 4 diferentes

* Preparación de la dilución de nuestra muestra.

Etiquetamos el tubo de 16x150 mm estéril con tapón de algodón, con los siguientes datos:
1.- equipo, 2.- número de muestra. Se agito vigorosamente por inversión el frasco con la muestra enseguida se adiciono al tubo 1 ml con una pipeta estéril. Con una pipeta de 10 ml se tomó 9 ml de SSI estéril y se vertió en el tubo. Se cerró perfectamente el tubo y se agitó procurando no mojar el tapón, esto se realizó para diluir la muestra.
Se lavo y esterilizó nueva mente el tubo para repetirlo con las demás muestras,ya que no había suficiente material.
1.2. Siembra del agua y sus diluciones en el medio MacConkey

* Utilizamos dos cajas de agar MacConkey para cada muestra. Una para la muestra sin diluir y otra para la dilución 1:10.
* Se esterilizó el asa bacteriológica al rojo vivo en la flama del mechero se dejó enfriar y enseguida se tomó una pequeña cantidad de la muestra y su contenido sedescargó cerca de un borde de una caja de agar MacConkey estéril para proceder a estriar el inóculo en el primer cuadrante de la caja Petri.
* Nuevamente se esterilizó el asa, se dejó enfriar y se estrió el segundo cuadrante de la caja empezando en uno de los extremos de la estría del primer cuadrante (este paso se repite dos veces más). Las muestras se sembraron por duplicado.
* Secolocaron dos pedacitos de Masking-tape en los extremos opuestos de la caja, se etiquetaron las cajas señalando con nombre, grupo, fecha.
* Por último se guardaron las cajas de agar MacConkey con la tapa hacia abajo en la estufa y se dejaron incubar a 37°C durante 24 horas.

2. Aislamiento y observación de las características macroscópicas y microscópicas de las Enterobacterias

2.1Selección de las colonias desarrolladas en agar MacConkey

Se seleccionaron 4 colonias distintas de bacterias y se observaron las siguientes características: forma, tamaño, superficie, elevación, borde estructura interna, color, opacidad y consistencia.

2.2. Resiembra de las colonias desarrolladas en el agar MacConkey

* Se dividió cada caja de agar MacConkey en 4 secciones,...