Maestra

Actividad Nº 4

Especie a modificar : papa: solanum blb (boliviense),
Caracteristica a producir: resistencia a la plaga de nematodos Nacobbus avernas, sp
Fundamentación
La propuesta incluyemejorar la resistencia, obteniendo genotipos resistentes a la plagas de nematodos que atacan los cultivos de papa en Argentina a partir de la incorporación de enzimas de Paecilomyces lilacinus  al ADNvegetal
Materia activa: Clase: Deuteromicetos. Orden: Moniliales (Hyphomycetes). Familia: Moniliaceae. Se trata de una suspensión de esporas de la cepa 251 del hongo Paecilomyces lilacinus queparasita diversos nematodos patógenos, ataca tanto a estados móviles de los nematodos como a las hembras sedentarias, pero es especialmente agresivo contra los huevos. Parasita las hembras de los nematodospatógenos, deforma su estilete, destruye sus ovarios y disminuye la eclosión de los huevos. Además, si el pH es ligeramente ácido, produce toxinas que afectan al sistema nervioso de los nematodos.Estos hongos producen enzimas con actividad amilolítica, quitinolítica, lipolítica, proteolítica,

Gen a aislar: Lmg 32 que codifica para la Proteína P 19 precursora de proteasas


Pasos:

1)extracción de ADN de las muestras
m 1: células de solanum blb m2: células de Paecilomyces lilacinus 

• lisis química con SDS(detergente) y EDTA (quelante)
• extracción química de loscontaminantes con fenol, en la fase acuosa superior se deposita el ADN
• agregado de sales (cationes) y etanol para que el ADN precipite
• centrifugar y lavar con etanol al 75 % frío, para eliminarlos contaminantes
• dejar evaporar el etanol sin dejar secar y suspender o lavar con TE buffer

2) identificar y localizar el gen: obtención del fragmento por espectrometría par cuantificar lasmuestras de ADN por electroforesis, sembrando el ADN en el gel de agarosa, pasándole corriente, los fragmentos migran al cátodo, agregarle un buffer que permita la corrida y una tensión con un marcador...