manejo de muestras biológicas

Laboratorio General de Bioquímica
1er Curso Grado de Bioquímica, curso 12-13

TEMA 4. MANEJO DE MUESTRAS BIOLÓGICAS

DISSECCIÓN DE UNA RATA Y RECOGIDA DE TEJIDOS Y FLUIDOS BIOLÓGICOS.PROCESAMIENTO Y CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS

OBJETIVO
Los objetivos concretos de esta práctica son:
- Conocer la localización y procedimiento de extracción de los principales órganos y tejidos de
larata, un modelo experimental usado habitualmente en la investigación en bioquímica y
biología molecular;
- Aprender los distintos protocolos de conservación y tratamiento de las muestras biológicas.PROCEDIMIENTO
Se sacrificará una rata de la cepa Wistar de aproximadamente 3 meses de edad
mediante decapitación con guillotina con el fin de evitar la interferencia de la anestesia en los
resultadosexperimentales. Se recogerá la sangre del cuello en un vaso de precipitados
previamente heparinizado con unas gotas de heparina al 0,1%.
Se practicará una incisión en la cavidad abdominal ytorácica de la rata con el fin de
dejar a la vista los órganos. Se observará la localización de los distintos componentes de los
aparatos digestivo, respiratorio, urinario y reproductor, y se extraerán lossiguientes órganos:
hígado, riñones, bazo, páncreas, corazón, pulmones, gónadas (ovarios, útero), tejido adiposo
blanco (depósitos: mesentérico, lumbar, gonadal e inguinal), tejido adiposo marrón,músculo
esquelético y cerebro. La velocidad de extracción de los tejidos, así como su procesamiento,
va a depender del tipo de determinaciones que se tengan que realizar en ellos. Como prácticahabitual las muestras biológicas deben mantenerse en todo momento en agua-hielo, para
evitar al máximo su degradación.
REACTIVOS
- Heparina 0,1%
- ClNa 0,9%
- Ácido perclórico (ClO4H) 12%
- KOH 2N /CO3HK 2N
- Tampón de homogenización (pH 7,4):
 Sacarosa 250 mM
 Tris-ClH 10 mM
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PROCESAMIENTO DE LAS...