Manual De Bioquimica

INSTITUTO TECNOLOGICO SUPERIOR DE CIUDAD HIDALGO

DEPARTAMENTO: ING. BIOQUIMICA

Manual de pruebas bioquímicas


Índice
INTRODUCCION…………………………………………………….1
Fermentación de la lactosa (Mc Conkey)……………….2
Agar Hierro de Kliger (KIA)…………………………………..3
Prueba del Indol …………………………………………………..5
Citrato de Simmons ……………………………………………..6
Agar Hierro Lisina (LIA) …………………………………………7
Agar Urea deChristiansens ………………………………….8
Prueba de la Fenilalanina (PPA)……………………………..9
Agar glucosa nitrato…………………………………………….10
RM – VP.………………………………………………………………12
TSI.………………………………………………………………………14
AGAR DNAsa ……………………………………………………...16
Coagulasa…………………………………………………………….17
Prueba de bilis esculina…………………………………………19
Prueba de leche con tornasol……………………………….20
Prueba de licuefacción………………………………………….21Introducción a tinciones………………………………………22
Tinción de Gram…………………………………………………..23
Rodamina-Auramina……………………………………………...25
Naranja de acridina………………………………………………25
ZIEHL-NEELSEN (BAAR)…………………………………………..26
Blanco de calcoflúor……………………………………………..26
Identificación de levaduras……………………………………27
Bibliografía…………………………………………………………….30

PRUEBAS BIOQUIMICAS
Las pruebas bioquímicas consistenen diversos test químicos aplicados a medios de cultivo, los cuales en base su a su reacción respuesta nos dan la pauta para identificar los diversos microorganismos presentes en el medio.
Su funcionamiento depende enteramente en determinar la actividad de una vía metabólica basada en un sustrato que se incorpora al medio de cultivo y el cual será incorporado o no durante el crecimiento delmicroorganismo.
Otro método para identificar y estudiar de mejor manera a los microorganismos es el uso de las tinciones, las cuales crean un contraste destacando la estructura y composición de los microorganismos de tal manera que su identificación sea más precisa.
Muchos colorantes utilizados en tinciones con frecuencia son moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan conintensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos. La mayoría de estos colorantes son de origen orgánico presentando así afinidad por los componentes de los microorganismos sin desnaturalizar a los mismos, generando así una ayuda de importancia en el ámbito de la microbiología.
A continuación se presentaran algunos de losmétodos mas comunes de tinciones y pruebas bioquímicas con el fin de auxiliar en la aplicación practica en laboratorio de microbiología.
Las pruebas bioquímicas mas frecuentes son:
*
* Fermentación de la lactosa (Mc Conkey)
* Agar Hierro de Kliger (KIA)
* Prueba del Indol
* Citrato de Simmons
* Agar Hierro Lisina (LIA)
* Agar Urea de Christiansens
* Pruebade la Fenilalanina (PPA)
* Agar glucosa nitrato
* RM - VP
* AGAR DNAsa
* TSI
* Coagulasa
* Prueba de bilis esculina.

Fermentación lactosa
(Mc Conkey)
El agar Mc Conkey es un medio sólido, diferencial y selectivo. Se usa para la descarte de bacterias con capacidad de fermentar la lactosa (Lac + y Lac -).
Composición gl :
* Peptona 20.0: fuente de nitrógenoy carbono para las Lac -.
* Lactosa 10.0: fuente de carbono para las Lac +.
* Sales biliares 2.5: le confiere carácter selectivo, inhibiendo el crecimiento de Gram +.
* Cloruro sódico 5.0: para mantener la tonicidad del medio (evitar osmosis).
* Rojo neutro 0.05: indicador que va hacer que el medio vire de coloración. Si las bacterias son Lac +, producirán ácidos derivados de lafermentación que darán al medio un aspecto rosáceo; si por el contrario son Lac -, el medio se basificará por el uso de la peptona y se tornará amarillo.
* Cristal violeta 0.001: interfiere junto con las sales biliares en la selectividad del medio.
* Agar 15.0: da consistencia al medio.

Lactosa + | Lactosa - |

Test kligler
En este test se emplean AGAR KIA (Agar hierro de kligler)...