MANUAL DE MICROversion Final 2014 2


UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE MORELIA
BIOTECNOLOGIA








MANUAL DE PRÁCTICAS
MICROBIOLOGIA

M.C. DAVID GARCÍA HERNÁNDEZ
M.C. ALMA TERESA MIRANDA QUIROZ


INDICE

Practica No 1. ESTERILIZACION POR MÉTODOS FÍSICOS y QUIMICO
Práctica No 2. PREPARACIÓN DE MEDIOS, METODOS DE CULTIVO, PURIFICACION Y MORFOLOGIA COLONIAL
Práctica No 3. VALIDACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SOLIDOS POR METODO ECOMÉTRICOPráctica No 4. CRECIMIENTO BACTERIANO Y FÚNGICO
Práctica No 5. ANTIBIOGRAMA
Práctica No 6. TINCIONES
Práctica No 7. MORFOLOGÍA DE HONGOS
Practica No 8. AISLAMIENTO DE VIRUS EN EMBRION DE POLLO
Práctica No 9. PRUEBAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS
Práctica No 10. CONSERVACION DE MICROORGANISMOS














Práctica No 1
ESTERILIZACION POR MÉTODOS FÍSICOS YQUIMICOS
OBJETIVO
Que el alumno conozca la importancia de los métodos físicos y químicos de esterilización como técnica de inhibición del crecimiento microbiano.


INTRODUCCIÓN
La presencia de microorganismos en todos los ambientes hace imprescindible que para estudiar una bacteria determinada sea necesario destruir todas las células vivas, esporas viables y virus que contaminan los medios olos instrumentos de trabajo; esto se consigue mediante la esterilización. La eficacia de la esterilización depende principalmente del tamaño y composición de la población, la concentración del agente, el tiempo de exposición al agente esterilizante y la temperatura.
Se utilizan dos tipos principales de esterilización:

Por MÉTODOS FÍSICOS
Por METODOS QUIMICOS


Agentes Físicos
Los agentesempleados con mayor frecuencia son: calor, bajas temperaturas, filtración y radiación. El calor, es el método más común para la destrucción de los microorganismos, este puede ser húmedo o seco.
Los medios de cultivo se esterilizan en autoclave, a través de calor húmedo. Todo el material de vidrio: pipetas, tubos, varillas, etc; se esteriliza con calor seco, siendo el horno de secado el aparato másempleado. En el caso de asa bacteriológicas se esterilizan en la llama. La filtración se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolábiles.

Agentes químicos
Ciertos compuestos químicos tienen una acción inhibitoria sobre las bacterias, en otras ocasiones demuestran una acción bactericida. Estos actúan como desinfectantes y no como esterilizantes normalmente, porque no pueden destruirfácilmente las esporas bacterianas. Entre los más comunes encontramos los fenoles, alcoholes, halógenos, metales pesados, detergentes catiónicos, oxido de etileno y aldehídos.
En comparación con los procedimientos físicos, estos métodos tienen una importancia secundaria. Los antisépticos son considerados venenos protoplasmáticos que, al actuar sobre los gérmenes, los destruyen. Algunos de ellos ejercensu acción nociva sobre todas las células, por lo cual se les considera venenos generales, por el contrario otros actúan sobre algunas especies bacterianas, mostrándose como venenos específicos.





MATERIAL REACTIVOS EQUIPO
Cajas petri Agar Balanza analítica
Tubos de ensaye con tapón de rosca Caldo nutritivo Autoclave
Matraces de 250 ml Agua Horno de secado
Micropipetas 1 mlAgar nutritivo Campana flujo
Vasos de precipitado de 50 ml Azul de metileno laminar
Probetas de 100 ml Alcohol Incubadora
Vasos pp 100 ml Dicromato de potasio
Espátulas Escherichia coli
Salmonella
Lámparas de alcohol Staphylococcus sp
Puntas micropipeta 1 ml Pseudomonas sp
Portacajas
Varillas de vidrio
Filtros de 0.45 – 0.22
Vasos pp 250 ml
EspátulasAsas bacteriológicas
Papel filtro
Pinzas de disección
Gradillas
Perillas
Pipetas de 2 ml
Tijeras
Tubos de ensaye medianos


METODOLOGIA

MÉTODOS FISICOS:
a) Esterilización por calor
1. Colocar 2 cajas petri en el horno de secado a una temperatura de 180º C/1hr en portacajas y 2 cajas en autoclave a 121°C/1 atm/15 min. Las 2 cajas restantes no se esterilizaran....