Metodos Directos Para Cuantificacion De Biomasa

| EXTRACCIÓN DE DNA PARA E. coli | ED 001 |
| LABORATORIO MICROBIOLOGICOMICRO-HI5 | Fecha: 11 de abril 2012Pag 1 de 4 |

| PCR EN TIEMPO REAL PARA E. coli | PCR 1 |
| LABORATORIO MICROBIOLOGICO | Fecha: 11 de abril 2012Pag 1 de 4 |

OBJETIVO GENERAL
Descripcion de la técnica de un sistema comercial del método de PCR en tiempo real para determinar el proceso de aislamiento,identificación y cuantificacion de una E. coli 0157H:7.
VALIDACIÓN
* La aplicación existente del método del kit de PCR-TR foodproof de la marca Merck Millipore para la ATCC de E. coli O157H7 en la cual se analiza sin tantos requerimientos de la biología molecular en menos de una hora, después de sólo 8 horas de enriquecimiento de uranio el análisis de la curva de fusión para diferenciar E. coliO157: H7 y E. coli O157: H7 no; en donde la inclusión de la enzima uracilo N-glycosylase reduce el riesgo de arrastre de contaminación y de diferenciacion. Este kit permite la extracción de ADN rápida y eficiente de este patogeno a partir de matrices que permiten la máxima garantía del producto en la detención y fiabilidad en un tiempo de 30 minutos e identificación de patógeno a partir dematrices alimentarias difíciles. Esta técnica presentada en este kit se han desarrollado en total acuerdo con los últimos requisitos de la ISO para PCR en tiempo real y su rendimiento ha sido probado por el Instituto de Investigación de la AOAC; por lo tanto se toman las normas del mismo para corroborar que es una validación secundaria y normalizada bajo referencias internacionales.

JUSTIFICACIONEscherichia coli (E. coli) es una de muchas especies de bacterias que viven en los intestinos de los mamíferos, conocidos como la flora intestinal y se manifiesta en muchas ocaciones en casos de enfermedades del aparato gastrointestinal tanto de hombre como de animales. Existen muchos serotipos de esta bacteria que enmarcan un sinnúmeros de sintomatología gástricas y que su identificación sedefine en el laboratorio microbiológico. Se conoce que el principal serotipo de E. coli enterohemorrágico es el O157:H7; este serotipo posee la peculiaridad de no fermentar el D-sorbitol por lo que se puede utilizar el agar MacConkey- sorbitol, que es una modificación de este medio que incorpora este azúcar en lugar de lactosa, para la identificación presuntiva de dicho serotipo. Una vezidentificadas como E. coli las colonias no fermentadoras del sorbitol, se procede a aglutinar con anticuerpos específicos para O157, pero este método alcanza la detención del patógeno después de 48 horas y los protocolos para la detección rutinaria de E. coli enterohemorrágica varían enormemente, por lo tanto se busca obtener la identificación del serotipo en un tiempo más corto por su especificidad. Porlo tanto se requiere implementar un método rápido, flexible, con menor costo comercial, de fácil acceso y con mayor fiabilidad, por consiguiente se emplea la técnica de PCR en tiempo real de foodproof de Merk, ya que este suministra la calidad cuantitativa en tiempo real para la detección y cuantificación simultánea de este agente patógeno. Arrojando Un número de copias, curvas y estándares queproporcionan en forma mas rápida su identificación y utilización de una plantilla de la extracción interna (ADN o ARN) para controlar la calidad de la extracción de los ácidos nucleídos y elimina resultados falsos positivos.

CONTENIDO DEL KIT

• E. coli-sp primers específicos / sonda de mezcla (150 reacciones BROWN)
FAM etiquetados, BHQ apaga

• E. coli-sp plantilla de controlpositivo (para el estándar curva roja)

• RNasa / DNasa libre de agua Reactivos y equipos a suministrar por el usuario PCR en tiempo real.

Kit de extracción de ADN

Este kit está diseñado para trabajar bien con todos los procesos que producen ADN de alta calidad con un mínimo de PCR inhibidores foodproof o componentes. Este kit está diseñado para trabajar bien con todas las mezclas maestras...