Metodos Fosfatasa
Páginas: 4 (897 palabras)
Publicado: 25 de octubre de 2011
Métodos Enzimáticos sobre la Fosfatasa Ácida
Fosfatasa ácida es cualquier enzima capaz de hidrolizar un fosfato orgánico en medio ácido. La proporción de esta enzima encontrada en el esperma no escomparable con la encontrada en ningún otro fluido biologico . La fosfatasa ácida prostática produce la hidrólisis de la fosforil colina en ácido fosfórico y colina. Esta enzima actúa entre un ph 4.5 –5.
El método práctico para medir la cantidad de fosfatasa ácida fue derivado del trabajo de King y Armstrong quienes encontraron que el cálculo de la cantidad de fenol liberado por un substrato dedisodio - fenil -fosfato proporciona una medida fehaciente del grado de hidrólisis del substrato producido por la fosfatasa.
Los valores de esta enzima en fluido seminal se expresarán en valoresKing - Armstrong y deberán ser superiores a 30 unidades.
Métodos Cromatograficos : TLC
Los métodos de cromatografía en capa delgada son utilizados principalmente cuando no es posible visualizar unespermatozoide completo. En este caso se tomara como determinante la negativa y como orientativa la reacción positiva.
En la cromatografía se analizaran las bases nitrogenadas colina y espermita y laenzima fosfatasa ácida.
Aquí describiremos la técnica desarrollada por D. Hessel y F. Medgalin :
Para la toma de muestra se recomienda cortar 1cm2 del soporte y centrifugarlo con 0.5 ml desolución 1 N de ác clorhídrico. Si la muestra es producto de un raspado, se tomara la cantidad encontrada en 1 cm2 y se procederá de la misma manera.
Agitar bien para la disolución y salificacion de lasbases y centrifugar.
Sembrar 20ul del extracto y 10ul de semen testigo. De poseerlas, es recomendable sembrar 10ul de colina y 10 de espermita.
La corrida se realizará en clorhídrico 1N.
Cubriradecuadamente el tercio superior de la zona de la corrida cromatográfica y revelar el resto con el reactivo de Dragendorff :
Solución A:
Subnitratote bismuto = 850 mg
Ácido Acético = 10 ml...
Fosfatasa ácida es cualquier enzima capaz de hidrolizar un fosfato orgánico en medio ácido. La proporción de esta enzima encontrada en el esperma no escomparable con la encontrada en ningún otro fluido biologico . La fosfatasa ácida prostática produce la hidrólisis de la fosforil colina en ácido fosfórico y colina. Esta enzima actúa entre un ph 4.5 –5.
El método práctico para medir la cantidad de fosfatasa ácida fue derivado del trabajo de King y Armstrong quienes encontraron que el cálculo de la cantidad de fenol liberado por un substrato dedisodio - fenil -fosfato proporciona una medida fehaciente del grado de hidrólisis del substrato producido por la fosfatasa.
Los valores de esta enzima en fluido seminal se expresarán en valoresKing - Armstrong y deberán ser superiores a 30 unidades.
Métodos Cromatograficos : TLC
Los métodos de cromatografía en capa delgada son utilizados principalmente cuando no es posible visualizar unespermatozoide completo. En este caso se tomara como determinante la negativa y como orientativa la reacción positiva.
En la cromatografía se analizaran las bases nitrogenadas colina y espermita y laenzima fosfatasa ácida.
Aquí describiremos la técnica desarrollada por D. Hessel y F. Medgalin :
Para la toma de muestra se recomienda cortar 1cm2 del soporte y centrifugarlo con 0.5 ml desolución 1 N de ác clorhídrico. Si la muestra es producto de un raspado, se tomara la cantidad encontrada en 1 cm2 y se procederá de la misma manera.
Agitar bien para la disolución y salificacion de lasbases y centrifugar.
Sembrar 20ul del extracto y 10ul de semen testigo. De poseerlas, es recomendable sembrar 10ul de colina y 10 de espermita.
La corrida se realizará en clorhídrico 1N.
Cubriradecuadamente el tercio superior de la zona de la corrida cromatográfica y revelar el resto con el reactivo de Dragendorff :
Solución A:
Subnitratote bismuto = 850 mg
Ácido Acético = 10 ml...
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