micro aplicada
Páginas: 6 (1439 palabras)
Publicado: 15 de marzo de 2013
Método del Numero Mas Probable (NMP) para la Cuantificación de Baterias Coliformes
OBJETIVO GENERAL
Aplicar el método del número más probable para determinar la presencia de microorganismos indicadores.
Familiarizarse con las NTC 4516, NTC 4092 y 4491 (1 – 4) para apoyo de esta práctica.
MARCO TEORICO
El método del Numero Más Probable (NMP) es una manera eficiente deestimación de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluación cuantitativa de células individuales no es factible. La técnica se basa en la determinación de presencia o ausencia en réplicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos buscados en una muestra. Por lo tanto, un requisito importante de este método es la necesidad de poder reconocer un atributoparticular de la población en el medio de crecimiento a utilizarse, para el caso de los coliformes/Escherichia coli, esa particularidad se basa en la capacidad de degradar la lactosa con producción de gas. El estimado de densidad poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabililística.
Bacterias coliformes
Los criteriosmicrobiológicos que emplea E. coli son útiles en aquellos caso en los que se determinar si ha ocurrido contaminación de origen fecal. Los coliformes y por supuesto E. coli perteneciente a ellos, forman parte de la normas microbiológicas para monitorizar la salubridad de una gran variedad de alimentos, aguas para el consumo y aguas para el cultivo. El grupo de los coliformes son bacterias conmorfología bacilar, Gram (-), aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativas, no esporógenas y capaces de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas a 37°C en un tiempo máximo de 48 horas. Las bacterias coliformes se incluyen dentro de las bacterias enterobacterias y se caracterizan por habitar el tracto gastrointestinal del hombre y otros animales. Los coliformes incluye los géneros:Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter. Las heces pueden ser vehículos de transmisión de otras bacterias no coliformes que son patógenas como Salmonella, Proteus y Shigella, algunas de cuyas especies causan infecciones intestinales como la fiebre tifoidea y la disentería bacilar. Ya que los microorganismos patógenos son muy sensibles y se encuentran en bajas concentraciones se toma comoindicador de contaminación fecal la presencia de coliformes y principalmente de E. coli.
En el caso del método del NMP se realizan dos pruebas, presuntiva y confirmativa; el ensayo se considera positivo para coliformes si la presuntiva es positiva y positiva para E. coli si la confirmativa muestra el crecimiento característico de esta bacteria. Hay que tener presente que en esta técnica sepuede presentar un porcentaje de error debido a que algunas cepas de coliformes no producen suficiente gas para ser detectado en la campana de Durham durante la prueba presuntiva y a su vez, se han encontrado que alguna cepas de Citrobacter pueden presentar el característico verde brillante en el agar EMB, tal como se esperaría para E. coli.
PROCEDIMIENTO
Antes de comenzar el laboratoriolávese las manos y tenga puesto los elementos de protección. Desinfecte con hipoclorito de sodio el área de trabajo; prenda el mechero y trabaje siempre junto a su llama. Finalizado el laboratorio la zona de trabajo debe ser desinfectada de nuevo.
A partir de la muestra de alimento traída al laboratorio, realice los siguientes procedimientos:
Prueba presuntiva
Durante esta parte del método,la muestra se siembra en un medio de enriquecimiento y selectivo, denominado Caldo lactosado bilis verde brillante al 2%, que permite el enriquecimiento e identificación de bacterias coliformes. La lactosa existente en este medio es fermentada produciendo ácido y gas que se detecta en la campana de Durham. La bilis presente en el caldo inhibe el crecimiento de cocos Gram (+) y bacilos...
OBJETIVO GENERAL
Aplicar el método del número más probable para determinar la presencia de microorganismos indicadores.
Familiarizarse con las NTC 4516, NTC 4092 y 4491 (1 – 4) para apoyo de esta práctica.
MARCO TEORICO
El método del Numero Más Probable (NMP) es una manera eficiente deestimación de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluación cuantitativa de células individuales no es factible. La técnica se basa en la determinación de presencia o ausencia en réplicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos buscados en una muestra. Por lo tanto, un requisito importante de este método es la necesidad de poder reconocer un atributoparticular de la población en el medio de crecimiento a utilizarse, para el caso de los coliformes/Escherichia coli, esa particularidad se basa en la capacidad de degradar la lactosa con producción de gas. El estimado de densidad poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabililística.
Bacterias coliformes
Los criteriosmicrobiológicos que emplea E. coli son útiles en aquellos caso en los que se determinar si ha ocurrido contaminación de origen fecal. Los coliformes y por supuesto E. coli perteneciente a ellos, forman parte de la normas microbiológicas para monitorizar la salubridad de una gran variedad de alimentos, aguas para el consumo y aguas para el cultivo. El grupo de los coliformes son bacterias conmorfología bacilar, Gram (-), aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativas, no esporógenas y capaces de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas a 37°C en un tiempo máximo de 48 horas. Las bacterias coliformes se incluyen dentro de las bacterias enterobacterias y se caracterizan por habitar el tracto gastrointestinal del hombre y otros animales. Los coliformes incluye los géneros:Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter. Las heces pueden ser vehículos de transmisión de otras bacterias no coliformes que son patógenas como Salmonella, Proteus y Shigella, algunas de cuyas especies causan infecciones intestinales como la fiebre tifoidea y la disentería bacilar. Ya que los microorganismos patógenos son muy sensibles y se encuentran en bajas concentraciones se toma comoindicador de contaminación fecal la presencia de coliformes y principalmente de E. coli.
En el caso del método del NMP se realizan dos pruebas, presuntiva y confirmativa; el ensayo se considera positivo para coliformes si la presuntiva es positiva y positiva para E. coli si la confirmativa muestra el crecimiento característico de esta bacteria. Hay que tener presente que en esta técnica sepuede presentar un porcentaje de error debido a que algunas cepas de coliformes no producen suficiente gas para ser detectado en la campana de Durham durante la prueba presuntiva y a su vez, se han encontrado que alguna cepas de Citrobacter pueden presentar el característico verde brillante en el agar EMB, tal como se esperaría para E. coli.
PROCEDIMIENTO
Antes de comenzar el laboratoriolávese las manos y tenga puesto los elementos de protección. Desinfecte con hipoclorito de sodio el área de trabajo; prenda el mechero y trabaje siempre junto a su llama. Finalizado el laboratorio la zona de trabajo debe ser desinfectada de nuevo.
A partir de la muestra de alimento traída al laboratorio, realice los siguientes procedimientos:
Prueba presuntiva
Durante esta parte del método,la muestra se siembra en un medio de enriquecimiento y selectivo, denominado Caldo lactosado bilis verde brillante al 2%, que permite el enriquecimiento e identificación de bacterias coliformes. La lactosa existente en este medio es fermentada produciendo ácido y gas que se detecta en la campana de Durham. La bilis presente en el caldo inhibe el crecimiento de cocos Gram (+) y bacilos...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.