Microbiologia II manual 1

2014
UNIVERSIDAD DEL VALLE
DE MÉXICO

CAMPUS LOMAS VERDES

504217

QUIMICO FARMACEUTICO
BIOTECNOLOGO

[MANUAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA II]

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ÍNDICE

Prácticas
Práctica 1. Extracción de ADN
Práctica 2. Tinción de Gram y Ziehl-Neelsen
Práctica 3. Observación in situ de los microorganismos del suelo
Práctica 4. Tinciones y morfología microscópica de Colonias de suelo
Práctica 5. Recuentode hongos filamentosos y levaduras en alimentos
Práctica 6. Cultivo de microorganismos del medio ambiente
Práctica 7. Clasificación de microorganismos de agua dulce.
Práctica 8. Aislamiento de hongos mediante el método extensión en placa
Práctica 9. Elaboración de un alimento de humedad intermedia
Práctica 10. Efecto de los factores físicos sobre el crecimiento de los microorganismos

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Microbiología II

Práctica de Laboratorio No 1.
Tema: Extracción de ADN

CONCEPTOS PREVIOS
Cromatina
Histonas
Ácidos Nucleicos
CUESTIONARIO PREVIO
1. ¿Qué es la cromatina?
2. ¿Para qué usar detergente?
3. ¿Para qué sirve el alcohol?

INTRODUCCIÓN
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los
iones salinos son atraídos hacia las cargas negativasdel ADN, permitiendo su
disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las
células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una
disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón
contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos,
proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínasasociadas al
ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y
separadas de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN
de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamílico.

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OBJETIVO
Obtener ADN de diferentes muestras vegetales.
MATERIAL Y MÉTODO
Material
Varilla de Vidrio
Tubo de ensayo
Vasos de precipitados
Cuchillo y tablapara picar
Batidora
Pipeta
Microscopio

Reactivos
Alcohol 96% muy frío
Agua destilada
Sal de Mesa
Detergente lava vajillas
Material Biológico
Fresas, cebolla, tomate, plátano, germen de
trigo o un puñado de guisantes.

Portas y cubreobjetos

MÉTODO
1.- En el vaso de precipitado pequeño hecha 3 cucharaditas de detergente
lavavajillas.
2.- Añade una cucharada de sal.
3.- Añade 25 mililitros de aguadestilada.
4.- Mantener en un baño de hielo esta disolución.
5.- Corta la zona central del vegetal elegido en cuadrados.
6.- Tritura los trozos del vegetal (en el vaso de precipitado grande) con un poco de
agua en la batidora (la mezcla de células y agua debe ser opaca), accionando 2
veces las cuchillas a impulsos de 10 segundos. Así se romperán muchas células.
7.- Mezcla en el recipiente grande eltriturado celular con la disolución inicial del
vaso.
8.- Agita vigorosamente la mezcla durante al menos 5 minutos, sin formar espuma.
9.- Haz pasar el líquido obtenido por un filtro de café.
10.- Añada 3 cucharaditas de jugo de piña o papaya y mezclar bien de forma
lenta.
11.- Deja reposar durante 5 minutos y agrega 2 ml de etanol deja reposar hasta
que se forme una zona turbia entre las 2 capas.(Mientras esperas este tiempo,
puedes ir recogiendo y limpiando todos los recipientes empleados anteriormente).
12.- Introduce una varilla justo debajo del alcohol (la zona turbia que queda entre
las 2 capas). Remueve la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán
enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN.
13.- Pasado un minuto, retira la varilla atravesando la capa dealcohol, con lo cual
el ADN quedará adherido a su extremo, con el aspecto de un copo de algodón
mojado.

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RESULTADOS

Elabore sus dibujos o fotografías.

CALCULOS
No aplica.

BIBLIOGRAFIA
1-Alexander,P., M. Bahret,, J. Chaves, G. Courts, N. Dalessio, (1992), Biología,Ed.
Prentice Hall, New Jersey,pp717.
2-Audersirk, T., G. Audersirk, (1997),Biología. La vida en la Tierra.4a ed, Ed.
Prentice Hall,...