Microbiologia

 Biotecnología Industrial
Lab. De Microbiología.











Tinción de bacterias y reconocimiento de morfologías bacterianasDocente:
- Eduardo LópezINTRODUCCION
Durante el pase de este laboratorio de Microbiología se realizo una serie de muestras, las cuales se observaron bajo el Microscopio.
El Microscopio es el instrumento más frecuentemente utilizado y elmás útil en el laboratorio de microbiología. Proporciona la amplificación aparente que nos permite ver organismos y estructuras invisibles a simple vista, con un aumento desde cien a cientos de miles de veces.
Hay distintas morfologías bacterianas, las cuales se clasifican en Cocos, Micrococos, Estreptococos, Estafilococos, Bacilos, Bacilos Flagelados, Espirilos entre otros, como muestra la imagenal costado. Para poder identificarlas y poder ver su estructura debes usar cierto tipo de tinciones, las cuales nos ayudaran para nuestro trabajo.
Figura 1: Distintas Morfologías de Bacterias
Un tipo de tinciones, es la tinción simple, en la que usualmente se ocupa Tinta China, Azul de Lactofenol y Azul de metileno, los cuales nos ayudaron para poder ver las estructuras de las bacterias y asípoder diferenciar de Bacilos o Cocaceas que fueron las principales que vimos.
Por otro lado, está la Tinción Gram, está es de tipo Compuesta o Diferencial, ya que ocupa más de un colorante para teñir y poder visualizar la bacteria. El péptido glican nos servirá de mucha ayuda, porque varía en las bacterias, y esto permite clasificarlas en dos grupos según la respuesta que tengan con la tinción ytambién dependerá de la presencia o ausencia de la membrana externa.
Las Gram Positivas (Staphylococus, Steptococus, entre otros), tienen una pared gruesa de péptido glican, ácidos teitoicos, ácidos lipoteicoicos y no poseen membrana externa. (Figura 2).
Las Gram Negativas (Enterobacterias, Pseudomonas, entro otras), estas tienen una pared de péptido glicano, a demás tienen membrana externa,presenta lipopolisacáridos y espacio periplásmico. (Figura 3).




Figura 2: Esquema de una Bacteria Gram Positiva. Figura 3: Esquema de una Bacteria Gram Negativa.
Materiales y Métodos
Para el primer paso práctico, que fueron de tinciones simples, se utilizaron los siguientes materiales.
Microscopio.
Agua destilada (pizeta).
Porta objetos.
Cubre Objetos.
Mechero.
Asa enLoop.
Placas de petri con la Bacteria que queremos conocer.
Papel absorbente.
Azul de Lactofenol.
Azul de Metileno.
Tinta China.
Lugol.
Aceite de inmersión.
Etanol al 95%.

Para el segundo paso práctico, ocupamos los mismos materiales que el primer laboratorio, pero agregamos otros.
Cristal Violeta.
Lugol.
Decolorante Alcohol – Cetona (95%).
Safranina.

Procedimientos paso prácticon° 1

Tinción simple.

Generalmente se utiliza sólo un colorante, y este lo utilizamos para ver la morfología de las bacterias.
1. Colocamos una gota de colorante de Azul de Metileno (Sthaphylococcus aureus) o de Azul de Lactofenol (Klebsiella), sobre la muestra. Dejamos incubar durante 1 minuto.
2. Debemos lavar el porta objetos, así que dejamos escurrir en pequeño y suave chorro de...