Microbiologia

Sede Santiago Sur

Ingeniería en Biotecnología Laboratorio de Microbiología.

Laboratorio N° 3 y 4 “Crecimiento, enriquecimiento y Aislamiento Microbiológico”
INTRODUCCIÓN: El cultivo actual sobre las propiedades de los microorganismos y de las interacciones que se dan entre ellos, están basados en estudios puros. Entendiéndose por CULTIVO PURO aquel que contiene sólo un tipo de bacterias.Sin embargo, es raro encontrarse con cultivos puros de microorganismos en hábitats naturales, por lo cual es necesario aislar los microorganismos presentes en una muestra mixta (una muestra mixta o CULTIVO MIXTO contiene dos o más tipos de bacterias) Para el aislamiento exitoso, y la obtención del cultivo puro de un microorganismo en particular, éste debe encontrarse en una alta proporción en lamuestra mixta. Los métodos de enriquecimiento están diseñados para incrementar el número relativo de un microorganismo, favoreciendo su desarrollo, supervivencia o su separación espacial de otros miembros de la población. I ENRIQUECIMIENTO: Este método fue ideado por Winodgrasky y Beijerinck y se basa en la aplicación a una microescala del principio de selección natural. Las técnicas deenriquecimiento son la mejor forma de obtener cultivos puros y al mismo tiempo hacen posible determinar el efecto de los factores ambientales sobre las poblaciones mixtas de microorganismos. Actualmente existen muchos métodos de enriquecimiento y su aplicación depende del tipo de microorganismo que se desea favorecer. a) Métodos Físicos: Son aquellos que hacen uso de temperatura de crecimiento, portratamiento por calor, radiaciones, presión, etc., que matan o inhiben el resto de las poblaciones. También pueden tomar ventaja de algunas propiedades físicas como tamaño movilidad, que permiten separar al microorganismo del resto de la población. Ejemplos de enriquecimientos físicos son: i. Bajas temperaturas de incubación para Psicrófilas: Las Psicrófilas se cultivan normalmente a temperaturas entre 0° y5° C, antes de aislarlas. (En tanto otras se retarda el crecimiento a estas temperaturas). ii. Alta temperaturas de incubación para Termófilas: Al contrario del caso anterior, ciertos microorganismos se inhiben con las altas temperaturas, a excepción de los termófilos que pueden de esta forma ser enriquecidos. Por ejemplo para las termófilas de la leche se pueden realizar diluciones seriadas dela leche y luego sembrar en un medio apropiado, incubándolas a 55°C.

Profesora: Alejandra Arancibia Díaz

iii. Luz visible para Cyanobacterias: Se toma un inoculo de la muestra de agua y se siembra en un medio apropiado (Líquido). Para enriquecer dichos cultivos se deja incubando en presencia de luz y a 37°C. Con esta temperatura se inhiben las algas eucariotas. Se debe examinar el cultivoperiódicamente hasta que se evidencie el desarrollo de este microorganismo. Una vez trascurrido esto, se toma un inoculo y se siembra en medio sólido, el cual se incuba a 25°C en una atmósfera enriquecida con CO2 y en presencia de luz. iv. Movilidad de Clostridium tetani: se incuba una muestra de procedencia clínica, de heces de animales o de suelo, sobre una pequeña aérea de agar selectivo paraeste microorganismo. Se incuba a 37°C en un ambiente anaerobio por un día. Paso el tiempo se debe examinar la superficie no sembrada del agar para evidenciar el desplazamiento. Se debe observar una fina película de crecimiento que se separado del área inoculada inicialmente; puede ser útil raspar el aérea con un asa para asegurarse que hay crecimiento, en caso de ser así, se toma una muestra y sesiembra en medio sólido para aislar. b) Métodos Químicos: Aquellos que pueden emplear agentes tóxicos para matar o inhibir el resto de las poblaciones, sin afectar el organismo deseado. También pueden proveer un nutriente en especial, que sea usado preferentemente por un microorganismo en particular. Ejemplos de enriquecimientos son: i. Enriquecimiento para Pseudomonas aeruginosa: Esta bacteria se...