Microbiologia

• Introducción Trabajo Práctico Nº 4 • Objetivo • Fundamento • Procedimiento • Resultados • Instrucciones para el uso del Sistema Anaeróbico Gaspak® • Bibliografía
INTRODUCCIÓN En los ambientes naturales los microorganismos se encuentran usualmente como poblaciones mixtas, pero si queremos estudiarlos, caracterizarlos e identificarlos, necesitamos tenerlos como cultivos puros. Un cultivo puro esaquel en el que todos los microorganismos provienen de una sola célula. La obtención de un cultivo puro, a partir de una población mixta, se lleva a cabo en dos etapas: 1. La muestra debe diseminarse de manera tal que los diferentes microorganismos queden lo suficientemente separados sobre la superficie de un medio de cultivo sólido, de manera que luego de la incubación ellos formen coloniasvisibles aisladas. Este proceso se conoce como aislamiento. En esta placa tendremos diferentes tipos de colonias correspondientes a los diferentes microorganismos presentes en la población original.

OBTENCIÓN DE CULTIVOS PUROS

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__________________________________________________________________ 2. Luego de tener las colonias aisladas,éstas deben transferirse con el filamento a un tubo que contenga agar nutritivo estéril para cultivar esa colonia aislada; este procedimiento se conoce como transplante. Para garantizar la pureza del cultivo obtenido, es conveniente, a partir de cada tipo de colonia aislada, repetir el proceso de aislamiento antes descrito. Se considerará que se ha obtenido un cultivo puro, cuando al realizar esteproceso, todas las colonias obtenidas presenten las mismas características. El medio de cultivo utilizado en el proceso de aislamiento dependerá, entre otros factores, de los requerimientos nutricionales de los microorganismos que se espera aislar y de la presencia de microorganismos que, por sus características y/o por la cantidad en que se encuentren en la muestra, dificulten la obtención delmicroorganismo objeto del aislamiento. En este último caso, se deben utilizar medios de enriquecimiento y medios selectivos que inhiban el desarrollo de gérmenes contaminantes. La temperatura y otras condiciones de incubación, variarán según los microorganismos, usualmente la temperatura óptima de los microorganismos patógenos para el hombre oscila entre 30 y 40ºC. Cuando el microorganismo que seintenta aislar es anaeróbico, deben tomarse las precauciones necesarias a fin de eliminar la presencia de oxígeno en el ambiente donde se desarrollará el mismo. Basándose en el origen y naturaleza de la muestra se pueden inferir los posibles microorganismos que se encuentran presentes en la misma, y ese conocimiento ayudará en la selección del medio y las condiciones de cultivo adecuadas. Paraiguales fines, es de gran utilidad el conocimiento de los síntomas de la enfermedad que padece la persona de quien se obtuvo la muestra analizada. OBJETIVO Al finalizar el trabajo práctico el estudiante estará en capacidad de: Ejecutar las técnicas básicas para el aislamiento de microorganismos en cultivo puro, a partir de una muestra que contiene una población mixta. FUNDAMENTO Al diseminar sobre unmedio de cultivo sólido una muestra de bacterias, diluida convenientemente, las células individuales quedarán lo suficientemente separadas unas de otras y crecerán en forma de colonias aisladas, a partir de las cuales se puede obtener un cultivo puro.

4.2

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__________________________________________________________________PROCEDIMIENTO Preparación de las placas de aislamiento (Cada estudiante preparará dos placas) 1. Marcar la tapa de cada placa estéril con su número de equipo y la fecha. 2. Fundir en un baño de agua hirviendo los tubos con 20 mL de agar nutritivo1, luego de que estén completamente fundidos, colocar en un baño de agua a 50°C. 3. Tomar el tubo con los 20 mL de agar fundido y enfriado a 50°C, secarlo bien...