Microbiologia

OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS Y SUS ESTRUCTURAS
Morfología de Organismos Procariontes
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I. INTRODUCCIÓN

Para poder observar los microorganismos directamente, se debe utilizar un instrumento de precisión: el microscopio.
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Los tamaños celulares de los organismos procariontes oscilan entre los 0.1 y 50 μm dediámetro. En promedio una bacteria de forma bacilar mide aproximadamente 1 x 5 μm, un coco bacilo 1 x 3 μm y una bacteria cocoide 0.25 x 1.2 μm.
Si lo que interesa observar es la motilidad o reactividad frente a sustancias químicas, es conveniente examinar las bacterias sin teñir. Por otra parte, si se quiere visualizar estructuras específicas, es necesario tratar las células concolorantes, proceso denominado tinción.
Los colorantes son compuestos químicos u orgánicos, generalmente sales, en las que uno de sus iones es el portador del color. Según su comportamiento químico los colorantes pueden clasificarse en ácidos, básicos y neutros.

Colorante ácido o aniónico: la carga del ión que imparte el color es negativa. Ejemplo: fucsina ácida, eosina, rojo congo.

Colorantebásico o catiónico: el ión que imparte el color tiene carga positiva. Ejemplo: cristal violeta, azul de metileno, safranina.

Colorante neutro: sal compuesta de un colorante ácido y otro básico. Ejemplo: eosinato de azul de metileno, giemsa.

El proceso de tinción supone una reacción de intercambio de iones entre el colorante y los sitios activos de la superficie o del interior de lacélula. Para teñir una preparación se pone una pequeña cantidad del material a examinar en un portaobjeto limpio y sin grasa. Si el inóculo proviene de un medio sólido, se emulsiona en una gota de solución fisiológica (o agua destilada) estéril. La muestra se extiende con el asa hasta que quede una fina película. Esta película se conoce como FROTIS.

Una vez realizado el frotis, se procede ala Fijación. Este es un procedimiento que mata las bacterias del frotis y hace que se adhieran al portaobjeto. La fijación se puede realizar sumergiendo el portaobjeto en alcohol metílico, éter o formalina, siendo el calor el más indicado para el trabajo de rutina. La fijación por calor se logra pasando el portaobjeto varias veces por sobre la llama del mechero hasta secar completamente elfrotis. Una vez realizado el frotis y la fijación, se procede a aplicar el o los colorantes según sea la tinción.


En bacteriología se utilizan tres clases de tinciones:

a) Tinción simple es aquella que hace uso de un solo tipo de colorante, y sólo sirve para observar tamaño y forma celular. Las más comunes son: azul de metileno, carbolfucsina, cristal violeta y safranina

b) Tincionesdiferenciales: permiten dividir las bacterias en grupos, de acuerdo a su reacción con los colorantes utilizados. Entre ellos la Tinción de Gram y la de alcohol-ácido resistente son las más usadas.

c) Tinción especial: Sirven para observar estructuras dentro o en el exterior de la célula bacteriana, inclusiones citoplasmáticas como también algunos microorganismos que dadas suscaracterísticas especiales no se tiñen adecuadamente con técnicas rutinarias.








1. TINCIÓN DIFERENCIAL DE GRAM.

Tinción Gram: es la técnica de uso más común en microbiología, y permite dividir las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram positivas y Gram negativas, de acuerdo a las propiedades físicas de la pared celular.

Técnica:
- Realizar el frotis y fijación de lamuestra.
- Aplicar cristal violeta durante un minuto (cubrir el frotis).
- Lavar con agua.
- Eliminar exceso de agua e inmediatamente aplicar solución de yodo (lugol) durante un minuto.
- Lavar con etanol durante 30 segundos (agente decolorante).
- Eliminar exceso de alcohol y aplicar safranina por 30 segundos.
- Lavar con agua y secar al aire.

El mordiente (Lugol)...