Microbiologia

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
Permite la separación de los microorganismos al estado de pureza a partir de una muestra problema .Se requiere un medio solido con gran superficie para que los microorganismos al ser diseminados sobre el medio, generen una cepa por formación de colonias separadas.

TECNICAS DE AISLAMIENTO PARA LA OBTENCION DE CULTIVOS PUROS .
A partir de un cultivo mixto, sepretende obtener un cultivo puro de bacterias a través de colonias aisladas.
Cada colonia representa una población de microorganismos procedentes de una misma célula, a partir de la cual se posee la seguridad de obtener dicho cultivo puro de un solo tipo de microorganismo. Para ello se utilizan diferentes técnicas de aislamiento, basadas en diluir la muestra inicial para obtener colonias aisladas.Una vez que se ha obtenido un cultivo puro, se puede mantener haciendo resiembras en tubos de agar inclinado o bien congelando las células en glicerol (10 – 30 %) a 70 ºC, en Nitrógeno líquido a -173 ºC o mediante liofilización.

AGOTAMIENTO
Para obtener colonias aisladas por la técnica del agotamiento la muestra se extiende sobre la superficie según se indica en la figura, de forma que alfinal de dicha siembra “por agotamiento”, la cantidad de inoculo se espera sea lo suficientemente bajo como para que se depositen células aisladas y distancias en la superficie del agar a partir de las cuales surjan, tras incubar colonias aisladas.

ESTRIAS ESCOCESAS
Se procede de forma similar al caso anterior, en lo que se respecta al método general para la siembra en placa y permite tambiénobtener colonias aisladas.
Manipulación de microorganismos AISLAMIENTO EN ESTRIA
AISLAMIENTO Y RECUENTO.BANCO DE DILUCIONES
Técnica que consiste en obtener una suspensión de la mezcla de microorganismos y hacer diluciones seriadas que se vierten en una placa Petri hasta conseguir colonias aisladas.
Se debe trabajar en condiciones estériles, flameando la boca de los tubos antes y después deintroducir la pipeta, en las proximidades del mechero. Mediante una pipeta estéril, tomar una muestra de cultivo mixto y depositar 1 mL en el primer tubo con 9 mL de solución pectonada, esto representa la dilución 10 -1.Agitar hasta conseguir una suspensión homogénea .Tomar otra pipeta estéril y transferir de esta primera dilución 1 mL al siguiente tubo con 9 mL de solución peptonada y asísucesivamente.
A partir del tubo con dilución 10 -2 y 10 -4, con una pipeta estéril, inocular 0,1 mL en una placa Petri extendiendo la muestra sobre la superficie con la espátula de Drigalski, la cual se debe de esterilizar mediante su introducción en alcohol y su posterior flameado, por lo que se pasa el asa impregnada en alcohol por el mechero y se deja consumir el alcohol completamente.Trasincubar se podrán obtener colonias aisladas. El recuento de estas coloniaspermitirá conocer el número de células existentes en el cultivo original.

Ci=N×D×10
Donde:
Ci=Concentracion Inicial (unidades:numero de celulas /mL)
N=nº de colonias
D=Dilución

MEDIOS DE CULTIVO.
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condicionesnecesarias para el desarrollo de los microorganismos.
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

Medios generales :

Permite el desarrollo de una gran variedad de microorganismos.

Medios de enriquecimiento:

Favorecen el crecimiento de un determinado microorganismo, sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto.

Medios selectivos:

Permiten el crecimiento de un microorganismodeterminado, inhibiendo el desarrollo del resto.

Medios diferenciales:

Ponen de relieve propiedades (normalmente bioquímicas) que un determinado microorganismo posee y de esa forma se puede distinguir ese microorganismo de otros que también pueden crecer en ese medio.

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados,...