Microbiologia

Pruebas Bioquímicas
Introducción
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.
El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente enun medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
Con frecuencia, la identidad de una especie requiere que se conozca de manera detallada su actividad bioquímica, porque otras características no son suficientemente distintivas o diferenciales
En ellaboratorio disponemos de numerosas técnicas para la caracterización bioquímica de una especie. Además de los productos finales de los procesos metabólicos, también se necesita conocer con detalle cómo se producen estos cambios, como ocurren paso a paso las reacciones químicas, cuáles enzimas intervienen, cuales son los productos intermediarios además de que se deben reconstruir las secuencias de lasreacciones bioquímicas que tienen lugar dentro de la célula.
En general el microorganismo se cultiva en medios que contienen una sustancia nutritiva específica o sustrato y después de la incubación del cultivo se examina para ver los cambios químicos que hayan ocurrido

Objetivo
Realizar algunas pruebas bioquímicas en medios de cultivo con sustratos específicos que permitirán demostraractividades metabólicas de microorganismos.
comprender la importancia de las pruebas bioquímicas para la caracterización e identificación de estos microorganismos en nuestro cultivo puro.


Procedimiento
*En un matraz Erlenmeyer ya esterilizado se agregan 30 ml de agua destilada y se agregan 1.5 g d agar Mac Conney , se diluyen bién agitándolo por encima del mechero.
*En 6 tubos de ensaye se leagrega el agar nutritivo Mac Conney por encima de la mitad de los tubos, se sellan con un tapón de hule, posteriormente se colocan en un vaso de precipitado y se tapan con papel aluminio.
*Una vez hecho lo anterior se coloca el vaso en el autoclave por 15 minutos a 121°C.
*Después se extraen de la autoclave, se dejan solidificar y se refrigeran hasta volver a utilizarlos.
*Se checan los tubosa las 24 y a las 48 horas para detectar si hay cambio
En la coloración de los medios de cultivo, de no ser así, se dejan incubando 24 horas más.

Técnicas de inoculación de tubos

1. Los tubos de LIA, TSI, KIA y Citrato de Simmons se inocularán por estría simple y por picadura hasta el fondo del tubo
2. Los tubos SIM y MIO se inocularán por picadura en el centro delmedio teniendo cuidado de no mover demasiado el asa, ya que al tratarse de medios semisólidos podría provocar errores en la determinación de movilidad.
3. El Caldo UREA se inocula suspendiendo una azada de microorganismos en el caldo.
4. Los tubos se incuban a 35-37 °C durante 24 a 48 horas procurando dejar un poco flojos los tapones de rosca de los tubos de cultivo.Preparando caldo nutritivo
En dos matraces se agregan 50 ml de agua destilada, 0.4 g de caldo nutritivo

Materiales
1 Gradilla
1 probeta de 100ml
3 matraces Erlenmeyer de 250 ml
3 vasos de precipitado de 250 ml
1 mechero Fisher
1 asa bacteriológica
2 tubos con medio SIM (sulfuro, indol, movilidad)
2 tubos con medio TSI (triple azúcar hierro) solidificado en pico de flauta
2 tubos conmedio citrato de Simmons solidificado en pico de flauta
2 tubos con caldo urea
2 tubos con medio LIA (lisina hierro agar) solidificado en pico de flauta
2 tubos con medio KIA (Kliger hierro Agar) solidificado en pico de flauta
2 tubos con medio MIO (Movilidad indol ornitina)
Peróxido de hidrógeno al 30%
Reactivo de Kovac
Resultados
Con los tubos anteriores, los cuáles se mantuvieron...