Microbiologia

PRÁCTICAS DE BIOQUÍMICA Nº2

“CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS CON ÁCIDO TRICLOROACÉTICO”

FECHA: 03/10/2012

FUNDAMENTO: El ácido tricloroacético es una solución que ha bajas concentracionesprecipita las proteínas, dando lugar a la aparición de un fino precipitado en suspensión. Este es visualizado con una turbidez cuya intensidad puede ser cuantificada espectrofotométricamente.
Cuanto másalta sea la concentración analizada, más intensa es la turbidez generada por el ácido tricloroacético, y por tanto, mayor es el bloqueo del paso de luz a través de la suspensión de precipitado. Estebloqueo se mide en absorbancias (A).

MATERIAL NECESARIO:

Tubos de ensayo (12).
2 pipetas graduadas de 2ml y 6 de 0,5ml.
7 cubetas de medida espectrofotométrica.
Espectrofotómetro quepueda medir 660 nm.
Papel milimetrado.
Matraz aforado 100ml.
Probeta 100ml.
Embudo.

REACTIVOS:

Suero fisiológico (solución acuosa de cloruro sódico a una concentración de0,85g/100ml). Lo hemos preparado de la siguiente manera:

0,85g de cloruro sódico.
100ml de agua destilada.

Solución de ácido tricloroacético al 2%, elaborado de la siguiente manera:Preparar 100ml de una solución de sulfato sódico en agua destilada a una concentración de 7g/ 100ml (7 g de sulfato sódico + 100ml de agua destilada).
Disolver 2g de ácidotricloroacético en la solución de sulfato sódico previamente preparada.
Filtrar el reactivo.

Albúmina de sangre (se han preparado 100ml de esta solución para toda la clase, y posteriormente ha sidodividida). Y a partir de ella se han de elaborar unos patrones de la forma que señalamos a continuación:

Preparar 10ml de una solución de albúmina en suero fisiológico a una concentración de0,7g/100ml.
Diluir la solución de albúmina preparada previamente del modo que se indica en el cuadro.

| Solución P1 | Solución P2 | Solución P3 | Solución P4 |...