Microbiología De Harinas

Bioquímica de Alimentos |
CUANTIFICACIÓN DE PROTEINAS (METODO DE BIURET), DESNATURALIZACIÓN DE PROTEÍNAS |
AutoresAndrade-Moreno, K.L*; Armijos-Espín, M.S; Aulestia-Olmedo, S.V; Burbano-Ureta, M.J.

Universidad Tecnológica Equinoccial
Av. Mariana de Jesús y Occidental
Campus Occidental-Quito,
Facultad de Ciencias de la Ingeniería.
Laboratorio de Bioquímica*kariandrademoreno@hotmail.com

| Fecha de realización11 de octubre de 2012
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CarreraIngeniería de Alimentos
| Curso3M
| Grupo77
| Fecha de presentación18/10/2012
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Introducción La cuantificación de proteínas en una muestra biológica es principal en la purificación de una proteína, con objetivos puntuales que pueden ser: la actividad específica de una preparación enzimática, diagnósticos de enfermedades,entre otros. Existen varios métodos para la cuantificación de proteínas, los cuales se basan en: 1.) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber la luz en UV, 2.) formación de derivados químicos y 3.) la capacidad de las proteínas para unir ciertos colorantes. Los métodos usados para la cuantificación son Lowry, Brandford, ácido Bicincónico, absorción en UV, inmunológico y reacción deBiuret. La mayoría de estos métodos tienen como principio alguna reacción del grupo arilo o alquilo de los aminoácidos. (Nueva Enciclopedia Larousse, 2007)Método de BiuretEs el método más simple para la determinación de proteínas solubles y la reacción es bastante específica, pues pocas sustancias interfieren en su determinación (los detergentes y soluciones básicas serían sustancias que podríaninterferir). Sustancias con dos o más enlaces peptídicos forman un complejo que genera una coloración púrpura-violeta (con máxima absorción a 540 nm) con sales de cobre (II) y grupos NH. El color es posible que se desarrolle por la formación de un ión coordinado, tetracúprico y dos grupos amida, la coloración a la cantidad de proteínas. |
Materiales y Métodos La solución de albúmina sérica bovinafue recibida ya realizada. Este se preparó de una solución madre de 10 mL, 3 mM con peso molecular 67000 esta solución se preparo en un balón de 10 ml y se mantuvo en la oscuridad y en refrigeración hasta la utilización.Para realizar la Curva de Calibración BSA se etiquetó tubos de ensayo del 1 al 5 con cantidades de agua de 175, 150, 100, 50 y 0 µL; de BSA 25, 50, 100, 150 y 200 µL; y, de Biuret1000 para todos los casos respectivamente, consiguiendo así 1200 µL de solución en los cinco casos. Después de colocar los volúmenes mostrados a los tubos se los procedió a incubarlos por diez minutos cubriendo con papel film trasparente, después de esto se realizó su lectura en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 550 nm. Obtenidos los resultados, se elaboró una curva de calibraciónexpresando el porcentaje de proteína como mM BSA.Para la cuantificación de proteína en la muestra vegetal de mortiño (Vaccinium floribundum kunth) se colocó los volúmenes de 100 µL de extracto vegetal, 100 µL de agua y 1000 µL de Biuret para los tres tubos, consiguiendo un volumen final de 1200 µL de solución. Después se procedió a medir la absorbancia de la muestra en el espectrofotómetro con losdiferentes volúmenes por triplicado. Al realizarse con los tres volúmenes se obtuvo resultados más bajos a 0,2, por esta razón se procedió a realizar nuevamente esta parte del experimento pero solamente con extracto vegetal y Biuret. Obtenido los resultados, se procedió a calcular la concentración de proteína en el extracto vegetal. Con la concentración de 3mM inicial y los volúmenes se obtuvo laconcentración dos; y con la absorbancia se logró determinar la fórmula y obtener las concentraciones finales. Para la desnaturalización de proteínas se utilizó un huevo y leche entera. Se procedió a separar la yema de la clara del huevo, se realizo dos series de 4 tubos cada uno con dos ml de leche entera y clara de huevo se numero los tubos de ensayo del 1 al 4. En los número uno se coloco tubos...