microscopía

Microscopio de campo oscuro.
El microscopio de campo
microscopios ópticos.

oscuro

se

encuentra

catalogado

entre

los

Desde muchos años atrás el microscopio óptico posibilito el descubrimiento
de las células y la elaboración de la teoría de que todos los seres vivos están
constituidos por células (1).
El microscopio óptico se compone de dos partes principalmente:

1.Parte Mecánica: Sirve de soporte.
2. Parte Óptica: constituida por tres sistemas de lentes.
* Condensador.
* Objetivo
* Ocular
El condensador del microscopio óptico convencional tiene como finalidad
proyectar un cono de luz sobre los elementos que están siendo analizados en
el microscopio. Después de atravesar el elemento, ese haz luminoso en forma
de cono penetra en el objetivo, proyectandouna imagen aumentada en el
plano focal del ocular ,que nuevamente la amplia y es recibida por la retina
como una imagen situada a 25 cm de la lente ocular (1).
El microscopio de campo oscuro esta constituido por un microscopio óptico al
cual se le acondiciona un condensador especial, este tiene como fin producir
una disfracen de los rayos luminosos enviándolos lateralmente sobre el
objeto enforma de un cono luminosos, y de
esta forma tampoco penetran directamente
al objetivo (2).

Existen dos clases de condensador de
campo oscuro:
* Cardiode
* Paraboloide.

Ambos son utilizados con el mismo fin, pero el cardiode tiene mayor
aplicabilidad en la investigación con Treponemas (2).
Para que el efecto de campo oscuro se logre , la apertura numérica del
condensador debe sermayor que la de el objetivo, lo cual ocurre con los
objetivos de pequeño y gran aumento no así con los de inmersión los cuales
deberán adicionarse de un diagrama de suspensión para la reducir la
apertura numérica (2).
RESOLUCIÓN DE MICROSCOPIA EN CAMPO OSCURO
Se llama poder de resolución de un sistema óptico a la
capacidad de separar detalles y es expresado por el
limite de resolución que esla menor distancia que existe
entre
dos
puntos
para
que
estos
aparezcan
individualizados.
Lo que determina la riqueza del detalle de la imagen
provista por un sistema óptico es su limite de resolución
y no su poder de aumentar el tamaño de los objetos (1).
El limite de resolución depende de la apertura
numérica (AN) del objetivo y de la longitud de onda de la
luz
utilizada
(1).
Enla microscopia de campo oscuro la AN no debe ser
superior a 1.0 ya que el condensador debe tener siempre
una apertura numérica superior a este valor. El limite de resolución del
objetivo esta dado por la siguiente formula: (1)
LR = k

x

Long. onda

AN * k = Constante ( 0.61)
* Log. onda = 0.55
Se toma la longitud de onda de la franja verde –
amarilla
por ser el ojo humano massensible a estos colores que a otros.
* AN = Apertura numérica no superior a 1.0

MÉTODOS PARA OBSERVACIÓN EN FONDO OSCURO
Existen diferentes métodos para observar un objeto sobre un fondo oscuro
es decir, utilizando únicamente la luz difractada por él.
OBSERVACIÓN INCIDENTE O POR REFLEXIÓN
La observación por reflexión con iluminación oblicua o anular es la mas
frecuentemente utilizada con losmicroscopios estereoscopios o lupas
binoculares. Generalmente no nos damos cuenta de que observamos en
fondo oscuro cuando el material ocupa todo el campo visual (3).

OBSERVACIÓN POR TRANSMISIÓN ( Fondo Negro Central)
La observación por transmisión con una pantalla central necesita la
utilización de un objetivo con pantalla interna de Spierer; con una pantalla
anular , la de Wilska:anoptral, versión original y no la fabricada
industrialmente que es un contraste de fase negativa a fuerte absorción (3).
OBSERVACIÓN
POR
TRANSMISIÓN
(Fondo
negro
Anular)
La observación con iluminación anular de abertura superior a la del objetivo,
es la única que, en la practica corriente , se denomina campo oscuro. Debe
indicarse que difícilmente puede utilizarse objetivos de gran aumento...