microscopia

1. MICROSCOPIA ELECTRONICA DE TRANSMISION
Existen 2 tipos de microscopios electrónicos:
1. Microscopio electrónico de transmisión: forma imágenes con los electrones que se transmiten a través de una muestra.
2. Microscopio electrónico de barrido: utiliza electrones que rebotan en la superficie de la muestra.
El microscopio electrónico tiene mayor resolución que el microscopio óptico y laresolución se debe a la proporción directa con la longitud de onda de la luz, mientras mayor sea la longitud de onda, es menor la resolución.
Los microscopios electrónicos de transmisión estándar operan con un espectro de voltaje de 10000 a 100 000 v. a 60 000 v., la longitud de onda de un electrón se aproxima a .05 angstroms.
El limite practico de resolución de los microscopios electrónicos detransmisión se hallan entre 3 y 5 angstrom pero el limite real cuando se observa una estructura celular esta entre 10 y 15 angstrom.
Los microscopios electrónicos consisten en una columna alta, cilíndrica y hueca por la que pasa el rayo de electrones, y una consola que contiene una panel con discos que controlan la operación de la columna por medios electrónicos.
La imagen que se obtiene delobjetivo de un microscopio electrónico solo tiene una magnificación de unas 100 veces pero esta imagen posee los detalles suficientes para incrementarla 10 000 veces más y el óptico no puede hacer esto.
Para percibir una imagen de una muestra en un microscopio electrónico lo electrones que pasaron por la muestra se enfocan en una pantalla fosforescente situada en la base de la columna. Loselectrones que golpean la pantalla excitan una cubierta de cristales fluorescentes que emiten su propia luz visible que el ojo percibe como una imagen de la muestra.

2. Preparación de la muestra para la microscopia electrónica.
Los tejidos que se examinaran en el microscopio deben fijarse y cortarse. La fijación del microscopios electrónico es mucho más critica que el del óptico por que los cortesse someten a un escrutinio más intenso. Se debe cuidar no dañar los tejidos de la muestra,
Para obtener la fijación más rápida y menor daño celular, se fijan e impregnan fragmentos muy pequeños de tejido. Los fijadores son sustancias que desnaturalizan y precipitan las macromoléculas celulares. Las sustancias con este efecto pueden ocasión coagulación o precipitación de materiales que no teníanuna estructura en la célula viva lo que conduce a la formación de un artefacto.
Los fijadores más usuales para la microscopia electrónica son el grutaraldehido, y el tetróxido de osmio. El glutaidehido es un compuesto de cinco carbonos y un grupo aldehído en cada extremo de la molécula. Los grupos aldehídos reaccionan con los grupos amino de las proteínas y establecen enlaces cruzados entre lasproteínas para formar una red insoluble. El osmio es un metal que reacciona con los ácidos grasos, lo que permite la preservación de las membranas celulares.
Una vez que el tejido ya está fijado se le quita el agua mediante una deshidratación en alcohol y los espacios que le quedan se llenan con un material que aguante el corte del tejido. Para la microscopia óptica se ocupan cortes biendelgaditos. Es bien raro encontrar cortes de menos de 5 μm de ancho en las muestras que se usan para microscopios ópticos, en cambio para la microscopia electrónica es mejor que sean más delgados que 1 μm (que es aproximadamente el grosor de 4 ribosomas).
Generalmente los tejidos que se van a cortar para la microscopia electrónica se impregnan en resinas epoxicas (que reaccionan cuando se les añade uncatalizador o “endurecedor”) por ejemplo el 1,4-butanediol diglicil éter, entre otras. Las secciones se cortan con el paso del bloque plástico sobre un borde muy afilado (hasta la madre) hecho de vidrio o de una hoja de diamante finamente pulido. Los cortes que se obtuvieron flotan en la superficie de un fondo de agua que esta atrás de la navaja, se recogen después con la rejilla metalica para...