Modelo Experimental

DESARROLLO DE UN MODELO EXPERIMENTAL PARA LA CARACTERIZACIÓN DE LA RESPUESTA FUNCIONAL DEL CORIOAMNIOS HUMANO
 
CLAUDIA VERÓNICA ZAGA CLAVELLINA 
Dirección de Investigación, del Instituto Nacional de Perinatología (INPer).
ROSARIO LÓPEZ VANCELL 
Departamento de Medicina Experimental, Facultad de Medicina, Universidad Nacional Autónoma de México, México, D.F.
ROLANDO MAIDA CLAROS Departamento de Neonatología del INPer.
JORGE BELTRÁN MONTOYA 
Departamento de Ginecología y Obstetricia, del INPer Instituto Nacional de Perinatología, México, México, D.F.
FELIPE VADILLO ORTEGA 
Dirección de Investigación, del Instituto Nacional de Perinatología (INPer).
 
Correspondencia 
Dr. Felipe Vadillo Ortega 
Instituto Nacional de Perinatología, 
Montes Urales 800, Lomas de Virreyes,México, D.F. 11000 
Tel. y fax.: 5520-0034 
Correo electrónico: felipe.vadillo@uia.mx
Recibido: 25 de mayo de 2004 
Aceptado: 22 de junio de 2004
 
RESUMEN
Objetivo: Este estudio fue diseñado para validar y caracterizar un modelo de cultivo de membranas corioamnióticas (MC) humanas que permita mantenerlas íntegras, viables y reproducir su capacidad de respuesta como tejido, que separa alcompartimiento materno-fetal ante diversos estímulos asociados al proceso infeccioso.
Material y métodos: Se utilizaron MC de mujeres con 37-40 semanas de gestación, sin trabajo de parto activo, ni señales clínicas y/o microbiológicas de infección cervicovaginal. Las MC fueron sujetadas a una placa de cultivo tipo transwell, que permitió la formación de dos compartimentos independientes delimitados porla membranas que se mantuvieron en cultivo 96 h, se evaluó la integridad estructural mediante resistencia eléctrica transepitelial y análisis histológico. La funcionalidad se midió estimulando de manera independiente o cunjunta amnios y/o corion con 500 ng/mL de lipopolisacárido o 5 ng/mL de IL-1β y cuantificando la secreción de TNFα por ELISA y de Metaloproteasa-9 (MMP-9) por zimografía,respectivamente. 
Resultados: Las diferentes poblaciones celulares de las MC se mantuvieron metabólicamente viables en el cultivo; los parámetros de integridad indicaron que no presentan cambios morfo-estructurales significativos. El estímulo con IL-1β induce secreción diferencial de MMP-9, que en corion alcanzó su máximo a la 4 h y en amnios a las 24 h. La estimulación selectiva con lipopolisacáridoindujo la síntesis diferencial de TNFα, siendo el corion el principal productor con aproximadamente 60%. 
Conclusiones: El sistema de cultivo de MC propuesto, permite estudiar cuantitativa y cualitativamente la contribución de las distintas poblaciones celulares del corioamnios en la respuesta ante el estímulo diferencial con agentes inmunológico-infecciosos.
PALABRAS GUÍA: Membranas fetales,corion, amnios, infección intrauterina, IL-1β, TNFα.
 
ABSTRACT
Objective: This study was designed to validate and characterize a culture model of human choriamniotic membranes (HCM) that keeps their viability, integrity and capacity to reproduce a response to several stimulus associated to an infectious process, as the tissue that separates the fetal and maternal compartment. 
Material andmethods: We use HCM obtained after delivery by elective cesarean section. Women with 37-40 weeks of gestation without evidence of active labor or presence of clinical an microbiological signs of intrauterine/vaginal infection. The membranes were mounted in transwell devices, allowing testing two independent compartments (chorion and amnion) by physically separating the upper and lower chambers. 500 ng/mLof lipopolysaccharide was added to amniotic or chorionic surface and secretions of TNFα was measured in both compartments by specific enzyme-linked immunosorbent assays and Metalloproteinase-9 (MMP-9) secretions after stimulation with 5 ng/mL of IL-1β. 
Results: The viability test showed that the different cellular populations of the HCM keep their metabolic viability along 96 h of culture....