Molecular

Extracción de ADN Genómico Bacteriano
FUENTES, Stefany. GONZÁLEZ, Andrés. TORRES, Sebastián.
Escherichia Coli, Imagen por cortesía:
http://otacon-san.livejournal.com/3782.html

INTRODUCCIÓN
La gran diferencia entre el genoma bacteriano y eucariota, radica en que los organismos eucariontes poseen 23 pares de cromosomas y a su vez poseen información codificante y no codificante, llamadosexones e intrones respectivamente, en cambio el genoma bacteriano es único, y no posee tales secuencias no codificantes de protección, por lo tanto este único ADN contiene dos cadenas complementarias de ADN que se encuentran enrolladas una alrededor de la otra, de forma helicoidal, con sus extremos unidos y así formar una molécula circular, en la que se claramente debe haber complementariedad denucleótidos. Como es característica tanto del ADN eucarionte como procarionte, cada par de nucleótidos o par de bases está compuesto por una base nitrogenada púrica o pirimidínica, por lo tanto la longitud de una molécula de ADN se expresa en pares de bases (pb) o kilo bases (kb). En nuestro laboratorio se realizó la extracción de material genético a partir de la bacteria Escherichia Coli, Gram (-),con capacidad móvil debido a que es una bacteria ciliada, y comprende uno de los huéspedes de la flora normal del tracto digestivo de mamíferos en donde colabora en la fijación de vitaminas B y K, por ello, el riesgo de infección por manipulación de esta especie es bajo si es tratada adecuadamente. Como es característico de las bacterias estas poseen un ADN que es prescindible o no es vital para lafisiología de la célula y la bacteria usada para nuestra experiencia la E. Coli se le han aislado más de 300 tipos distintos de plásmidos, en cambio el genoma circular de esta bacteria contiene alrededor de 4’500,000 pb o 4500 kb.
El estudio de los cultivos de bacterias adquiere una gran relevancia en el ámbito médico, cuando las distintas especies, cepas y tipos han sido aislados, se puededeterminar de esta manera la virulencia y patogenicidad que pueden acarrear las distintas bacterias, con finales inclusive de muerte para el organismo afectado.
Para realizar una exitosa extracción de material genético a partir de bacterias, usamos los siguientes reactivos: Lisozima A, cloroformo – alcohol isoamílico, cloruro de sodio, S.D.S., acetato de sodio, entre otros. De esta manera se obtuvouna excelente cantidad y calidad de ADN bacteriano.
MATERIALES Y MÉTODOS
Debido a facilidad de obtención, en nuestra práctica de extracción del genoma bacteriano de la bacteria Escherichia Coli, o simplemente E. Coli, esta es una bacteria alargada y en forma de bastón y por lo tanto de acuerdo a su morfología es clasificada como un bacilo, el cual reacciona negativamente a la tinción de Gram, esdecir luego de este proceso su coloración final será de color rosada; su metabolismo es anaeróbico y capaz de fermentar la glucosa y la lactosa, es móvil por presencia de flagelos perítricos, se encuentra generalmente en el intestino haciendo parte de la flora normal de algunos mamíferos, y por conclusión se infiere que puede vivir en aguas residuales (negras).
Por su facilidad de obtención y suimportante papel en el cuerpo humano, se ha estudiado y analizado de muchas maneras. A continuación presentamos los pasos y procedimientos que realizamos para la extracción de ADN de la bacteria Escherichia Coli:
Para comenzar, nuestro profesor, nos brindó una muestra para cada grupo de un medio de cultivo líquido en el que se desarrolla la bacteria Escherichia Coli, este cultivo se encontraba enun recipiente cuyo líquido en donde se manifestó el medio de cultivo poseía un color anaranjado, una vez nos brindaron la muestra esta fue puesta en la centrifugadora, para poder así obtener la masa celular deseada, la cual es la que adquiere importancia para este experimento, este procedimiento se llevo a cabo en un tubo eppendorf y luego se agregan 600μL de buffer T.E con un micropipeta de...