Nada

Universidad Adventista de las Antillas
Departamento de Ciencias - Biología

Biología Molecular - Lab 2 – Diluciones y Gráficas


JACardé


Introducción:
El trabajar con diluciones es algo rutinario en un laboratorio de biología molecular e investigación ya sea porque necesitas concentraciones muy pequñas para pesar y medir por lo que tienes que partir de una solución mas concentrada auna menor o porque las soluciones comerciales vienen a unas concentraciones (stocks) altas y se usan a unas concentraciones (working) mas ligeras. Igualmente en el conteo de células o bacterias para sembrar o cuantificar se usa mucho el concepto de diluciones en serie.

Diluciones:
Cuando se hacen diluciones siempre se comienza con una concentración de algo y añades mas solvente, bajando laconcentración del soluto. Asi que si haces cálculos y ves que la concentración aumenta!!... algo hicistes mal! Revisa el trabajo para asegurarte que la concentración disminuyó.



Lo importante aqui es definir las variables bien.

Ej: Si tienes un buffer de fosfato de sodio 0.2M, y tomas 10 ml de el y lo añades a 90 ml de agua. Cual es la concentración final de la nueva solución o de ladilución? Para esta fórmula necesitas 3 de las 4 variables;
C1= concentración inicial, 0.2M
V1= volumen inicial, 10ml
C2 = ? concentración final a la queda que no sabemos, x, lo que nos preguntan!
V2= volumen final, _____ml. Este es un posible punto de error: 90 ml no es el volumen final, es 100ml.

Factores de dilución (fd): es la segunda forma de hacer diluciones.
- Un factor dedilución es una expresión matemática que te permite calcular cuanto más diluído está una solución resultante preparada a partir de una solución stock o mas concentrada. Se calcula como el volumen final dividido entre el volumen inicial (el que tomastes del concentrado). Cual es el factor de dilución en el ejercicio anterior?


100ml/10ml = 10 o lo que es igual, una dilución de 1 en 10; osea 0.1 o sea diluido 10 veces!,
Una vez tienes el factor de dilución, que se hace con el?
- ó lo multiplicas por la C1 C2=C1 x fd C2= 0.2M x 0.1 = 0.02M
- ó divides la C1 entre el fd. C2=C1/fd; C2= 0.2M/10 = 0.02M
- la [ ] sera 1/10 de la original!

Diluciones Múltiples:
Si vas a hacer un dilución en serie (3 veces o n veces), laconcentración final se calcula de la siguiente forma:
Fd1= 100ml/10ml = 10
Fd2 = 50ml/2ml = 25
Fd3 = 90ml/30ml= 3
Calculando el FD para cada paso de la serie y luego multiplicando los tres factores de dilución

FDTotal= 10x25x3= 750 a 1

Si comenzamos con el mismo 0.2M cual sera la nueva concentración:
Cfinal= C1/fdtotal = 0.2M/750 = 0.00027 M = 0.27mM = 270 μM ó ________________________Gráficas

Generalmente los resultados de experimentos se reportan o resumen en forma de gráficas. Repasaremos como hacer gráficas manuales y por computadoras.




Manual: Una gráfica es una representación de la relación entre dos variables ó 2 cantidades. Una es la que se controla, se llama variable independiente y se coloca en el eje de X. La otra cantidad es la que cambia conformecambia la independiente, se le llama variable dependiente y se coloca en el eje de Y.

Ejercicio: Se colocaron distintas cantidades de proteína en una serie de tubos y por espectrofotometría se midió la absorbancia. Cuál es la variable independiente? La dependiente? Prepara una gráfica donde se representa p (proteina) vs q (Absorbancia), donde p va en x y q en y usando papel de gráfica.(Recuerda poner título, leyenda y descripción de que es lo representado en la gráfica)
Data:
|Concentración de proteinas (mg) |Absorbancia |
|0.001 |0.05 |
|0.003 |0.16 |
|0.005 |0.225...