Ninguno

Múltiples formas moleculares de ATP: hexosa 6-fosfotransferasa, de hígado de rata. (*)

Recibido en Mayo 26, 1964
Varios grupos de investigadores, usando diferentes enfoques, han sido capaces de distinguir y caracterizar parcialmente dos ATP: hexosas 6-fosfotransferasas en el hígado de rata (Viñuela et al., 1963; Walker 1963). Usando fraccionamiento mediante sulfato de amonio, Viñuela etal., (1963) describió una de estas enzimas, con una baja Km para glucosa (0.01 mM), como una típica hexoquinasa animal (EC 2.7.1.1), y las otras, con una alta Km para glucosa (10 mM), como glucoquinasas (EC 2.7.1.2). La distinción entre ambas enzimas es de especial interés, ya que pareciera que la actividad de la enzima de alta Km varía sustancialmente con la dieta, alteraciones hormonales (Viñuelaet al., 1963; Sharma et al., 1963; Salas et al., 1963) y también durante el desarrollo del individuo (Walker 1963; Oliver y Cooke, 1964).
Ya que hemos encontrado que el total de actividad fosforiladora de glucosa del hígado de rata, decreció en condiciones de ayuno o con una dieta libre de carbohidratos y alta en grasa (Niemeyer et al., 1962b, 1963; Pérez et al., 1964) es de claro interés elinvestigar si las dos fosfotransferasas variarían bajo las diferentes condiciones de alimentación (dietas) antes estudiadas. Experimentos preliminares mostraron que ensayos simultáneos de ambas actividades no entregaba resultados enteramente confiables, luego se tomó un enfoque más directo, siendo éste, la aislación de las enzimas para así realizar ensayos separados en cada una de ellas. Duranteestos estudios, cuatro muestras con actividad fosforiladora de glucosa fueron separadas desde el hígado de rata mediante cromatografía de intercambio de iones. Los resultados son mostrados aquí.
Ratas macho albino, que pesaban aproximadamente 200 g fueron usados. Los animales fueron alimentados con diferentes dietas, o fueron privados de comida durante varios días antes de su muerte. Lacomposición de la dieta ya ha sido informada (Niemeyer et al., 1962a).
Los resultados de separaciones típicas mediante cromatografía hechas en extractos de hígado de ratas privadas de comida, o alimentadas con diferentes dietas, son mostrados en la Fig.1. Tres peaks de actividad (A, B, D) fueron detectados cuando 100 mM de glucosa, fueron usados como sustrato. Sin embargo, cuando el ensayo fue realizadocon 0.5 mM de glucosa, un cuarto peak de actividad (C) pudo ser avistado. Esta última muestra fue inhibida por exceso de sustrato. El peak D, el cual representa 88.2 ± 2.4 % de la actividad total en ratas alimentadas con una dieta balanceada, mostró el cambio más significativo cuando se alteró la dieta. De hecho, casi desapareció en los animales que recibían la dieta alta en grasas y libre decarbohidratos (Fig. 1, IV). Si las áreas bajo los peaks fueran sometidos a un proceso de integración, al igual que los resultados referidos a los sujetos de 100 g de peso corporal, se podría obtener información semicuantitativa. Las variaciones observadas en las muestras A, B, y C de ratas alimentadas con diferentes dietas son de poca relevancia comparados con los cambios sufridos por la muestra D(resultados no publicados).
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Fig. 1. Fraccionamiento cromatográfico de isoenzimas de ATP: hexosa 6-fosfotransferasa, realizados en hígados de ratas, las cuales fueron sometidas a diferentes regímenes alimentarios.
I. Dieta balanceada. Carga de la columna: 17 ml de líquidosobrenadante obtenido después de tratamiento con CM-celulosa (CMs), 200 mg de proteína, 0.035 unidades/mg de proteína.
II. Dieta de carbohidratos, después de una con alto contenido graso. 19 ml CMs, 228 mg de proteínas, 0.021 unidades/mg.
III. Ayuno. 7 ml CMs, 90 mg de proteína, 0.011 unidades/mg.
IV. Dieta alta en grasa. 12 ml CMs, 134 mg de proteína, 0.005 unidades/mg.
Cincuenta por ciento...