Nom 112 Ssa1 1994

Preparación:

Disolver los componentes en un litro de agua.

Ajustar el pH a 7,0 con hidróxido de sodio 1 N.

Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml o en cualquier volumen múltiplo de nueve según se requiera.

Esterilizar durante 15 minutos a 121 ± 1,0 °C.

Después de la esterilización los volúmenes finales de la solución de trabajo deben ser iguales a los iniciales.

Si estediluyente no es usado inmediatamente, almacenar en lugar obscuro a una temperatura entre 0 a 5 °C por un tiempo no mayor de un mes, en condiciones tales que no alteren su volumen o composición.

6.1.2 Medios de cultivo.

Caldo lactosado (medio de enriquecimiento para agua potable y hielo).

Caldo lauril sulfato triptosa (medio de enriquecimiento selectivo).

Caldo lactosa bilis verde brillante(medio de confirmación).

En el caso del análisis de agua potable y hielo puede utilizarse caldo lactosado o caldo lauril sulfato triptosa con púrpura de bromocresol (concentración 0,01 g/l de medio), como alternativa al uso de campanas de fermentación. Los tubos positivos se manifiestan por el vire del indicador a color amarillo.

6.1.2.1 Caldo lactosado

CUADRO 1

Ingrediente Medio deMedio de



concentración 1,5 concentración



sencilla



Extracto de carne 4,5 g 3,0 g



Peptona de gelatina 7,5 g 5,0 g



Lactosa 7,5 g 5,0 g



Agua destilada 1000,0 ml 1000,0 ml



Disolver los ingredientes en 1 l de agua, calentando si es necesario o el medio completo deshidratado, siguiendo las instrucciones del fabricante.



Ajustar el pH finalde tal manera que después de la esterilización éste sea de 6,9 ± 0,2 a 25 °C.



Distribuir en volúmenes de 10 ml en tubos con dimensiones de 16 x 160 mm el medio de concentración sencilla y de 20 ml en tubos de 20 x 200 mm el medio de concentración 1,5, cada tubo debe tener campana de fermentación.



Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 121 ± 1,0 °C.



Enfriar rápidamentepara evitar una exposición excesiva al calor. El aspecto del caldo es claro y de color beige.



Se puede utilizar una concentración doble del medio de cultivo, en cuyo caso se emplearán 10 ml del caldo preparado, cuando se agreguen 10 ml de la muestra.



6.1.2.2 Caldo lauril sulfato triptosa.



CUADRO 2



Ingrediente Medio de Medio de



concentración 1,5 concentraciónsencilla



Triptosa 30,0 g 20,0 g



Lactosa 7,5 g 5,0 g



Fosfato dipotásico 4,125 g 2,75 g



Fosfato monopotásico 4,125 g 2,75 g



Cloruro de sodio 7,50 g 5,0 g



Lauril sulfato de sodio 0,15 g 0,1 g



Agua destilada 1000,0 ml 1000,0 ml



Disolver los componentes en 1 l de agua, calentando si es necesario o el medio de cultivo completodeshidratado, siguiendo las instrucciones del fabricante.



Ajustar el pH de tal manera que después de la esterilización éste sea de 6,8 ± 0,2 a 25 °C.



Distribuir en volúmenes de 10 ml en tubos con dimensiones de 16 x 160 mm el medio de concentración sencilla y de 20 ml en tubos de 20 x 200 mm el medio de concentración 1,5, cada tubo debe tener campana de fermentación.Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 121 ± 1,0 °C.



Se recomienda almacenar el medio una vez preparado.



Las campanas de fermentación no deben de contener burbujas de aire después de la esterilización.



Se puede utilizar una concentración doble del medio de cultivo, en cuyo caso se emplearán 10 ml de caldo preparado, cuando se agreguen 10 ml de muestra.



6.1.2.3 Caldolactosa bilis verde brillante



FORMULA



INGREDIENTES CANTIDADES



Peptona 10,0 g



Lactosa 10,0 g



Sales biliares 20,0 g



Verde brillante 0,0133 g



Agua 1,0 l



Disolver los componentes o el medio completo deshidratado en agua, calentar si es necesario.



Ajustar el pH, de tal manera que después de la esterilización éste sea de 7,2 a 25 °C....