Ntp 299

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NTP 299: Método para el recuento de bacterias y hongos en aire
Méthode puor le comptage des bacteries et des fongs dans l'aire Method for airborne bacteria and fungi counting Vigencia Válida ANÁLISIS Criterios legales Derogados: Redactora: Mª del Carmen Martí Solé Licenciada en Farmacia CENTRO NACIONAL DE CONDICIONES DE TRABAJO Esta Nota Técnica de Prevención expone la metodologíacorrespondiente a la toma, transporte y conservación de muestras de aire para la determinación de bacterias y hongos, así como el fundamento del método analítico, su campo de aplicación y sus limitaciones. Vigentes: Desfasados: Criterios técnicos Operativos: Sí Actualizada por NTP Observaciones

Fundamento del método
El método se basa en el muestreo del aire problema mediante el aparato SAS (Surface AireSystem) compact. De los muestreadores descritos en la NTP-203, se escogió éste por ser de fácil manejo, portátil y que permite elegir el medio de cultivo adecuado a cada requerimiento. El aire muestreado se hace incidir sobre un medio de cultivo determinado, según se pretendan valorar bacterias u hongos. Posteriormente se procede a la incubación a una temperatura adecuada y finalmente se efectúa elcontaje de colonias expresando el resultado en ufc/m3 (unidades formadoras de colonias por metro cúbico).

Fig. 1

Reactivos y productos
Todos los reactivos deben tener como mínimo la especificación "para análisis". El agua utilizada ha de ser bidestilada o de calidad equivalente.

Medios de cultivo
Triptisoy Agar (TSA)

Es un medio de cultivo sólido compuesto por:
q q q q q

Peptonade caseína...............15,0 g/l Peptona de soja.......................5,0 g/l Cloruro sódico.........................5,0 g/l Agar-Agar.............................15,0 g/l pH del medio a punto de uso: 7,3 aproximadamente

Preparación del medio: Añadir 40 g de esta mezcla a un litro de agua destilada. Dejar embeber y llevar a ebullición hasta disolver totalmente el agar. Esterilizar alautoclave durante 15 minutos a 121 ºC. Con esta preparación llenar las cápsulas de Petri, haciéndolo en el ambiente estéril de la cámara de bioseguridad, dejar enfriar y una vez solidificado el medio colocar las cápsulas 24 horas en la estufa de cultivo a 37ºC. Pasado este tiempo se observan las placas desechando las que presenten contaminación. Agar de sabouraud con cloranfenicol Es un medio de cultivosólido, específico para hongos, compuesto por:
q q q q q q

Peptona de caseína............ 5,0 g/l Peptona de carne............... 5,0 g/l D (+) Glucosa................... 40,0 g/l Cioranfenicol...................... 0,5 g/l Agar - agar...................... 15,0 g/l pH del medio a punto de uso: 5,6, aproximadamente

Preparación del medio: Suspender 65,5 g de la mezcla en un litro de aguadestilada y llevar a ebullición. Esterilizar al autoclave durante 10 minutos a 121ºC. Evitar el sobrecalentamiento que afectaría a la gelificación. Una vez distribuido en placas de Petri hacer la prueba de esterilidad como se ha explicado en el punto anterior.

Solución de Armil al 1/1000
Se disuelve 1 ml. de Armil en 1 litro de agua.

Aparatos y material
Muestreador de aire . "SAS compact"
Talcomo se describe en el punto 5 de la Nota Técnica de Prevención nº 203, existen diferentes tipos de muestreadores de aire para contaminantes biológicos. En la presente NTP se expone el procedimiento a emplear con el equipo "SAS compact" (ver la figura 1, cuyas características son las siguientes:
q

q

q

El aire a examinar es aspirado a una velocidad fijada durante un tiempo variable,através de una cubierta de protección perforada con múltiples agujeros pequeños de diseño especial. El flujo de aire es dirigido sobre la superficie de una cápsula de Petri del tipo "Rodac", que contiene el medio de cultivo adecuado para el examen microbiológico que se desee hacer. El aparato es transportable, funciona con bateria recargable y el control del tiempo de funcionamiento es programable....
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