observacion microscopica de microorganismos



PRACTICA N°5
OBSERVACION MICROSCOPICA DE BACTERIAS

I. OBJETIVO
Aprender a usar las técnicas microscópicas para diferenciar bacterias morfológicas y tintorialmente.

II. FUNDAMENTO

El examen microscópico de microorganismos constituye una de las técnicas características de la Microbiología y aunque es posible observar ciertos microorganismos sin colorear (Ej. protozoarios), en elcaso de las bacterias se hace necesaria la coloración de los preparados para aumentar el contraste   con el fondo.
Para obtener el máximo aprovechamiento de la observación microscópica, debe poder relacionarse el comportamiento tintorial con la estructura y composición química de las diferentes partes de la anatomía bacteriana.

III. MARCO TEORICO
Las bacterias solo pueden ser vistas con ayudadel microscopio con gran poder de resolucion. En la mayoria de las veces, son necesarias 400 ó 1000 aumentos para ver a estos microorganismos como pequeños cuerpos puntiforme, y además, se deben aplicar ingeniosas tecnicas de coloración para resaltar algunas estructuras de su célula y contrastarlos con el medio.
Para realizar los estudios microscópicos de bacterias se deben disponer de cultivosjóvenes, los cuales preparados convenientemente en láminas portaobjetos, se llevan al microscopio y con los objetivos de mayor poder de resolución (40 X ó 100X) se observan para sacar la mejor información acerca de su forma, agrupación, tamaño, estructuras y reacciones tintoriales.
Por lo menos, se deben distinguir dos tipos de observaciones microscópicas:
Observaciones al estado fresco.- Que sehacen con células vivas, sin ayuda de colorantes
Observaciones de preparaciones coloreadas.- Que se hace con bacterias muertas y teñidas con ciertos colorantes que confieren su color al reaccionar con algunas estructuras de la célula.




OBSERVACIONES MICROSCOPICAS DE BACTERIAS AL ESTADO FRESCO
Se hacen para determinar la movilidad de los microorganismos vivos.
TECNICA DE LA GOTA PENDIENTE-Ponga un poco de vaselina en las cuatros esquinas de una lamina cubreobjetos.
-Deposite una pequeña gota de agua en el centro del cubreobjetos.
-Emulsione en el agua una pequeña porción de masa microbiana.
-Adherir una lamina portaobjetos excavada, haciendo coincidir el centro de la gota con la parte mas profunda de la depresión.
-Voltear la preparación, llevarla al microscopio y observarlacon el objetivo de 40X, en seco, o con el objetivo de 100X, previa adición de una gota de aceite de inmersión.
Considerar a los microorganismos con la movilidad positiva, si se desplazan rápidamente saliéndose del campo microscópico; y con movilidad negativa o inmóvil si solamente gira en su mismo lugar, por el movimiento Browniano que le confiere el líquido.
OBSERVACION ENTRE LAMINA PORTAOBJETOSY LAMINA CUBREOBJETOS
Se realiza para determinar el tamaño, la forma y agrupación de las bacterias. Se siguen los siguientes pasos:
-Prepare una emulsión de bacterias en la superficie de una lámina portaobjetos.
-Coloque una lámina cubreobjetos en el centro de la emulsión.
-Observe al microscopio con el objetivo de inmersión y sacar la máxima información acerca del tamaño. Forma y agrupaciónde los microorganismos.

TINCION NEGATIVA

Se realiza tiñendo la superficie de la lámina portaobjetos con un colorante que no entra en reacción con los microorganismos y, por lo tanto, los deja como estructuras transparentes que resaltan en un fondo oscuro.
La tinción negativa sirve para obtener una imagen mas exacta del tamaño real de las células bacterianas y, a veces, para determinar lapresencia de capsulas.
Para determinar el tamaño de las bacterias, seguir la técnica que a continuación se detalla:
-Prepare una emulsión bacteriana en un costado de una lámina.
-Coloque una gota de tinta china al lado de la emulsión.
-Mezcle la tinta china y la emulsión microbiana con un asa de kolle.
-Extender la preparación, con ayuda de una lamina portaobjetos inclinada en 45°, haciendo...