OBTENCION DE INTERLEUCINA HUMANA RECOMBINANTE

OBTENCION DE INTERLEUCINA-2 HUMANA RECOMBINANTE EN Escherichia coli
EN UN CULTIVO INCREMENTADO
O. Ruiz*, M. Pérez, L. Varas y V. Lugo
Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB), P.O.Box6162, Cubanacán, Playa, Habana, Cuba.
Telefax: (53-7) 218070 / 336008. E.Mail: odalys.ruiz @cigb.edu.cu.
Palabras claves: Recombinante, E.coli, Cultivo incrementado.
Introducción: La Interleucinaes una glicoproteína producida
por los linfocitos T que desempeña un papel fundamental en
la regulación de la respuesta inmune, su uso terapéutico ha
tenido un notable aumento en los últimos años enel
tratamiento contra el cáncer. Se expresa en E.coli en forma de
agregados insolubles, a partir de los cuales es posible
purificarla y recuperarla en su forma activa, su utilización ha
sidoposible con el desarrollo de variantes tecnológicas a
escala productiva que garantizan su disponibilidad de
cantidades suficientes.
En el trabajo se realiza el diseño de un cultivo incrementado
capazde alcanzar 50 g/L de peso húmedo, el cual se escaló
hasta 50L de volumen efectivo y por último se realizó un
análisis económico comparativo entre la fermentación batch
y la fed batch.Metodología: La cepa empleada fue la JM 101, transformada
con el plásmido pIL-2mA12, que es portador del gen
Interleucina-2 Humana, bajo el control del promotor
triptofano y del gen que codifica para laβ-lactamasa que le
confiere resistencia a la ampicillina como marcador de
selección. El medio inóculo empleado fue LB con 100 µg/mL
Ampicillina y el medio de los fermentadores fue:.2.22 g/L
KH2PO4, 0.375g/L NaCl, 6.63 g/L (NH4)2SO4, 1 g/L YE, 10 g/L
Triptona, 10 g/L HC, 100 mL/L Sales trazas 10X, 0.109 g/L
FeSO4.2H2O, 0.50% Glucosa, 3.70mM CaCl2, 3.08mM MgSO4
· 7H2O, 100 µg/mL Ampicillina, 20µg/mL Tiamina, 100 µg/mL
Triptofano. El incremento contiene: 123.24 g/L Glucosa y 5.75
mg/L CoCl2.6H2O.
Resultados y Discusión:
Se diseñó un cultivo incrementado capaz de alcanzar 50 g/L
de peso...