Paper En Castellano 1

Rev. Salud Anim. Vol. 27 No. 3 (2005): 152-158

EXPRESIÓN DE GENES REPORTEROS EN LA LÍNEA QT 35
UTILIZANDO LA TRANSFECCIÓN CON LIPOSOMAS
Edenis Ramos*, Ivette Espinosa*, A. Vega*, D. Naranjo*, Siomara Martínez*,
Gabriela Calamante** y Maritza Barreras*
*Grupo de Biología Molecular y Virología Animal, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA),
Apartado 10, San josé de las Lajas, La Habana,Cuba. Correo electrónico: ramos@censa.edu.cu;
**Lab INTA, Castelar.
RESUMEN: Para la obtención de vacunas recombinantes utilizando vectores virales vivos es necesario
la transcripción y expresión del gen foráneo, el cual se introduce a la célula en un plásmido de expresión,
mediante un procedimiento de transfección celular, por lo que resulta imprescindible la optimización
de los parámetros. Seensayaron diferentes concentraciones de ADN, diferentes volúmenes de
lipofectamina y diferentes tiempos de expresión del gen LacZ como gen reportero en la línea celular
QT 35. También fueron evaluados otros vectores portadores de los genes reporteros LacZ y GFP bajo
el control de los promotores de CMV y temprano (E) de poxvirus. Como resultado se obtuvo un mayor
nivel de expresión del gen lacZutilizando 1.5 ul lipofectamina, 0.4 ug de ADN a las 72 horas
postransfección, datos que serán necesarios en futuros ensayos de expresión transiente de genes en este
tipo de células.
(Palabras clave: Gen lacZ; transfección; liposomas; células QT35; genes reporteros)

EXPRESSION OF REPORTER GENES IN QT 35 LINE USING TRANSFECTION WITH
LIPOSOMES
ABSTRACT: In order to optimize the lipofection conditions inQT 35 cell line, different concentrations
of DNA, volumes of lipofectamine and optimal expression time of lacZ gene as reporter gene were
assayed. Other vectors with the reporter genes lacZ and GFP were evaluated under the control of CMV
and poxvirus early promoters. As a result, there was a higher expression level of lacZ using 1.5 ul
lipofectamine, 0.4 ug of DNA at 72 hr postransfection . Theseoptimal values are important in future
assays of transient expression of genes in this type of cells.
(Key words: lacZ gene; transfection; liposomes; QT 35 cells; reporter genes)

INTRODUCCIÓN
La transfección de ADN es uno de los procedimientos experimentales cruciales en la biología
molecular y celular (7), ya que la introducción de ADN
exógeno, dentro de células eucariotas, constituye unaherramienta esencial para el estudio de la expresión
del gen, replicación del ADN, la recombinación y
transfección celular a niveles moleculares (22).
Estos análisis pueden realizarse, a través de una
expresión transiente del ADN transfectado o una expresión de largo término, en la cual el ADN se integra
al cromosoma de la célula hospedera (15).

Existen diversos métodos físicos y químicos para
laeficiente introducción del ADN con su propio espectro de ventajas y desventajas. Dentro de ellos, se destaca la transfección mediada por liposomas catiónicos
o lipofección, considerado mejor, que la transfección
por DEAE-dextrano, fosfato de calcio y la
electroporación, en términos de mayor eficiencia de
transfección y reproducibilidad (3,22), que no presenta
las desventajas de los otros métodos:citotoxicidad,
dificultades técnicas y equipamiento necesario.
La eficiencia de la transfección varía ampliamente
entre diferentes tipos de células (22) y no siempre los
investigadores seleccionan las líneas celulares por la

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facilidad de transfección, sino más bien por sus propiedades biológicas. De ahí que en nuestro trabajo
utilicemos una línea celular de origen aviar (QT 35),
procedente decélulas fibroblásticas de codorniz por
las ventajas que posee en la propagación de los
avipoxvirus en cultivos más estables y seguros que
en cultivos de fibroblastos de embrión de pollo, de
interferencias por transmisión vertical de otros virus o
la presencia de anticuerpos (9). Tampoco requiere
de la preparación de cultivos primarios que necesiten
una labor intensa de manipulación y se evita la...