Perfil De Proyecto

2.2.- CLASIFICACIÓN DE LAS TINCIONES
Se sigue la siguiente clasificación, atendiendo a su especificidad:
Tinciones simples
Tinciones diferenciales
Tinciones estructurales

2.2.1.- TINCIONES SIMPLES
Las tinciones simples son aquellas en las que se utilizan un solo colorante y tienen como objetivo permitir la observación de la morfología bacteriana. Existen dos clases, azul de metilenoy verde malaquita.
2.2.2.- TINCIONES DIFERENCIALES.
Son aquellas que permiten diferenciar a las bacterias atendiendo a su afinidad por el colorante (se emplean dos tipos de colorante), tenemos dos tipos GRAM y ZHIEL-NEELSEN.
2.2.2.1.- GRAM.
Esta coloración fue desarrolladas, en 1983, por Christian Gram y es la coloración diferencial mas utilizada en microbiología Por medio de ella, sedividen a los microorganismos en dos grandes grupos, grampositivos y gramnegativos, según retengan o no el primer colorante (cristal violeta) utilizado en la tinción.
El fundamento de esta técnica es tratar a las bacterias una vez realizado el frotis correspondiente con cristal violeta y una solución de yodo, todas ellas se van a teñir de un color violáceo, al unirse el colorante al yodo de lapared celular. Si a continuación se les trata con una solución de decolorante (alcohol-cetona), las bacterias grampositivas retendrán el colorante, debido a la composición de su pared, mientras que las gramnegativas no lo retienen, siendo eliminado el colorante. Si a continuación, se les trata con un colorante de contraste (fucsina diluida, también se puede emplear safranina), las bacteriasgramnegativas serán teñidas por él. La tinción Gram, puede utilizarse no solo para bacterias procedentes de las colonias aisladas, sino para el examen directo de muestras clínicas, de tal modo que se puede evaluar la flora que predomina en esa muestra.
En la tinción de Gram, se forma un complejo de cristal de iodo insoluble en el interior de la célula, que en el caso de las Bacteria Gram negativas puedeextraerse con alcohol pero no en las Bacteria 6
Gram positivas. El alcohol deshidrata las bacterias Gram positivas que poseen paredes celulares muy gruesas con varias capas de peptidoglicano. El resultado es el cierre de los poros de las paredes impidiendo el escape del complejo de cristal de iodo insoluble.
En las Bacteria Gram negativas, el alcohol penetra rápidamente en la capa externa quees rica en lípidos sin que la fina capa de peptidoglicano evite el paso del solvente, permitiendo de este modo la eliminación del complejo de cristal de iodo insoluble. No obstante, la reacción de Gram no se relaciona directamente con la química de la pared celular puesto que las levaduras que poseen una gruesa pared celular pero una composición química completamente distinta, también se tiñen comoGram positivas. Por lo tanto, el motivo de una reacción Gram positiva no son los constituyentes químicos sino la estructura física de la pared.
Reactivos:
Cristal violeta
Lugol
Alcohol-cetona
Safranina

Técnica
Preparar los frotis bacterianos.
Teñir con cristal violeta 2 min.
Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
Cubrir con Lugol 1 min.
Lavarcon agua el exceso de Lugol.
Decolorar con alcohol hasta que la preparación deje de perder color (30 segundos)
Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
Teñir con fucsina básica 5 min.
Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
Secar la preparación.
Examinar al microscopio fijándose sobre todo en el color de cada preparación.

Los tiemposde exposición a los colorantes son orientativos. Cada vez que se prepara la batería de colorantes para realizar la tinción Gram presentan algunas diferencias respecto a los preparados en otro momento, por lo que puede ser necesario ajustar los tiempos. En un laboratorio de Microbiología, cada vez que se preparan los colorantes, se suelen hacer pruebas con cultivos patrón de los dos tipos...