Potencial de degradación de hc por bacterias

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE COSTA RICA
ESCUELA DE BIOLOGÍA
INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

Informe de Práctica de Especialidad

Estudio del potencial de degradación de los
hidrocarburos por Acinetobacter sp. y
Pseudomonas putida para su aplicación
en la biorremediación de suelos contaminados

Caroline Braibant Wayens

Cartago, 2004

Estudio del potencial de degradación de loshidrocarburos
por Acinetobacter sp. y Pseudomonas putida para
su aplicación en la biorremediación de suelos contaminados

Informe presentado a la Escuela de Biología del Instituto Tecnológico
de Costa Rica como requisito parcial para optar al grado de
Bachiller en Ingeniería en Biotecnología

Miembros del Tribunal

_________________________
Dra. Silvia Soto Córdoba
Profesora Asesora____________________
MSc. Nancy Hidalgo Dittel
Lectora

_____________________
Dr. Miguel Rojas
Lector

ÍNDICE GENERAL
RESUMEN
DEDICATORIA
AGRADECIMIENTOS
INDICE DE CUADROS
INDICE DE FIGURAS
INDICE DE ANEXOS
INTRODUCCIÓN
La contaminación con hidrocarburos
El petróleo y sus hidrocarburos
Tratamientos físicos, químicos y biológicos

i
ii
iii
iv
v
viii
1

Parámetros indicadores dela metabolización de los hidrocarburos

2
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6
6
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8
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15

REVISIÓN DE LITERATURA

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La biodegradación de los hidrocarburos
Bioaumentación con Acinetobacter sp. y Pseudomonas putida
Resultados de una bioestimulación con nutrientes inorgánicos y
orgánicos
Potencial de la biorremediación de los suelos contaminados con
hidrocarburos por Acinetobacter sp. yPseudomonas putida

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Tratamientos físicos
Tratamientos químicos
Tratamientos biológicos

Los microorganismos que degradan los hidrocarburos
Acinetobacter sp. y Pseudomonas putida
Microorganismos Genéticamente Modificados (MGM)
Biodisponibilidad del agente contaminante : surfactantes naturales y sintéticos

El metabolismo de los hidrocarburos

20
20

OBJETIVO

22

Objetivogeneral
Objetivos específicos

23
23

MATERIALES Y MÉTODOS
Material biológico, medios de cultivo y precultivos y
preparación de los inóculos
Material biológico
Medios de cultivo
Precultivos y preparaciones de los inóculos

Pruebas de biorremediación en medio líquido
Pruebas en erlenmeyers de 250 ml
Pruebas en reactor de dos litros
Lectura del pH
Lectura directa de la densidad ópticaLectura indirecta de la densidad óptica
Medida de viabilidad
Pesos Secos
Determinación del consumo de hidrocarburo por el método gravimétrico
Determinación de la concentración del hidrocarburo por el kit enzimático Total
Petroleum Hydrocarbures (TPH) Immunoassay Method (HACH) para muestras
acuosas
Determinación del consumo de glucosa por Accuntrend® alpha
Determinación del consumo deglucosa por Cromatografía Líquida de Alto
Rendimiento (HPLC)

Pruebas sobre suelo artificialmente contaminado con diesel
Origen de la tierra y determinación de sus características físico-químicas
Medida del pH y de la conductividad eléctrica de la tierra
Determinación del contenido en materia seca de la tierra
Medidas de la densidad y el volumen de la tierra
Pretratamiento de la tierra :tamizado, contaminación artificial e inoculación
Lectura de la Demanda Bioquímica de Oxígeno (DBO) : Principio de los
métodos VELP Scientifica y OxiTop® OC110
Análisis de la evolución de la microbiología
Determinación de la concentración del hidrocarburo por el kit enzimático Total
Petroleum Hydrocarbures (TPH) Immunoassay Method (HACH) para las
muestras de tierra

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RESULTADOS

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Cultivo de los microorganismos sobre medio enriquecido
Degradación del los hidrocarburos en erlenmeyers de 250 ml

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Degradación efectuada por Acinetobacter sp. LMG 1056
Degradaciones efectuadas por Pseudomonas putida LMG 2257, P. putida
ATCC 39213, P. putida DSMZ 6414 y P. putida DSMZ...