Degradacion de petroleo por bacterias hidrocarburoclasticas

PRÁCTICA



INTRODUCCIÓN

La industria petroquímica es importante en una sociedad moderna, no obstante la falta de un programa de protección ambiental, hace que el medio ambiente se contamine al producirse derrames de petróleo.
Si bien la degradación del petróleo y sus derivados es un proceso natural, pero muy lento por la complejidad molecular de suscompuestos, la acumulación de los contaminantes en la biósfera va en aumento debido a la utilización, por ejemplo, de hidrocarburos como fuente de energía.

En el Perú se registran derrames de petróleo desde 1978, uno de ellos fue el producido en el oleoducto marino de Talara, estando entre los últimos el ocurrido el año 2000 en el río Marañón que afectó la Reserva Pacaya-Samiria y el producidoel30 de enero del 2008 en el que, debido a una explosión producida en un barco carguero,se derramaron frente al mar de Tumbes 1300 barriles de crudo de petróleo.
Una mejor alternativa de solución es el proceso de biorremediación, que es el tratamiento biológico del suelo, aire y agua, mediante la biodegradación de compuestos tóxicos para transformarlos en compuestos de menor o ningún impactoambiental. Así en la biodegradación de hidrocarburos, se utilizan ciertas bacterias con alta capacidad degradativa, entre estas: Brevibacterium, Spirillum, Xanthomonas, Alcaligenes, Arthrobacter, Nocardia, Flavobacterium, Vibrio, Achromobacter, Acinetobacter, Micrococcus, Pseudomonas aeruginosa, Serratia rubidae, Bacillu ssp, Pseudomonas mendocina, Pseudomonas aureofasciens, etc., las cualesdisminuyen la concentración de hidrocarburos presentes en el ambiente y al mismo tiempo son inocuas para la salud y el medio ambiente. Estas bacterias producen bioemulsificantes y biosurfactantes que disminuyen la tensión superficial entre el petróleo y el medio acuosofacilitando el acceso microbiano a la fuente de carbono insoluble para su degradación.

OBJETIVOS

 Comprobar la efectividad de ciertabacterias para degradar el petróleo como única fuente de carbono
 Determinar el crecimiento microbiano al inicio y al final del proceso.
 Observar consumo de petróleo en el biorreactor.

MATERIALES

Material Biológico.
 Cepas mixtas de Bacterias Hidrocarburoclásticas

Equipos.

 Balanza analítica
 Incubadora
 Biorreactor burbujeado

Materiales de vidrio.

 MatrazErlenmeyer
 Pipetas
 Vaso de precipitados
 Tubos de ensayo.
 Placas petri
 Frasco schott

Utensilios.

 Mechero o lámpara de alcohol
 Perlas de vidrio
 Pinzas
 Asa y porta – asa microbiológica

Insumos y Reactivos.

 Caldo petróleo 5%
 Agar nutritivo
 Agar Plate Count
 Agua destilada
 Solución salina 0.85% de Cl Na

Otros.

 Algodón
 Papel Craff y aluminio
Cinta de Ph

PROCEDIMIENTO

1. REACTIVACIÓN DE LAS CEPAS.
Se repicó por estrías los cultivos mixtos de bacterias Hidrocarburoclásticas aisladas en tubos con Agar nutritivo. Posteriormente Se Incubo a 37ºC por 18 a 24 horas.



2. PREPARACIÓN DEL INOCULO.
- Proliferación celular: Se sembró en toda la superficie de dos placas con Agar nutritivo, e incubo a 37ºC por 18 a 24 horas.

-Cosecha celular:
Añadimos 3 ml de SSF estéril en cada placa con el cultivo y 5 perlas de vidrio estéril, luego movimos las placas suavemente hasta obtener la suspensión celular, esta suspensión obtenida se coloco en un matraz estéril de 250 ml. Y se adiciono en el medio base + petróleo al 1%.


Fig.2 Colectando la Suspensión CelularFig.3 Suspension Celular

- Obtención del inóculo:
Realizamos el recuento celular mediante siembras por incorporación en agar Plate Count de diluciones seriadas 105; 106 UFC/ml
EL CÁLCULO DE LA CONCENTRACION DEL INOCULO SE OBTENDRA EN LOS SIGUIENTES PASOS:

1- PREPARACIÓN DEL BIORREACTOR.
Armar y esterilizar el biorreactor...